По сравнению с двухшаговым ферментным закрытием, метод одношагового совместного транскрипционного закрытия может значительно упростить процесс. Метод ориентирован на результат и включает добавление аналогов колпачка к реакции транскрипции in vitro (IVT). Аналоги колпачка могут быть введены в начале транскрипции, и после её завершения можно получить mRNA с колпачковой структурой. Текущие аналоги третьего поколения могут избежать обратного закрытия и напрямую добавить структуру Cap 1 к транскрипционному продукту.
Учитывая иммуногенность mRNA in vivo и эффективность трансляции, процесс IVT часто использует определённые виды модифицированных НТП, а распространённые модифицированные нуклеотиды — псевдouriдин (Ψ), N1-метил-псевдouriдин (N1Ψ) и 5-метилцитозин (5mC).
Рисунок: Схема реакции совместной транскрипции и закрытия mRNA
Детали услуги
Услуга |
Детали услуги |
Срок доставки (рабочий день) |
Совместное транскрипционное закрытие |
Транскрипционный ответ in vitro (Чистый аналог Clean Cap) |
1-2 |
| Модификации нуклеотидов (Ψ/Н1Ψ/5мС) |
| Удаление шаблона ДНК (ДНаза I) |
Оптимизация условий IVT - опция |
Проектирование и оптимизация компонентов реакции |
3-7 |
Наши особенности
- Разнообразные стратегии модификации нуклеотидов
Несколько необязательных стратегий модификации нуклеотидов могут улучшить экспрессию белка.
- Оптимизированная реакционная система
Достижение высокого коэффициента транскрипции и высокой эффективности закрытия.
- Стабильный процесс закрытия
Достигните показателя закапирования более 95%.
Эффективно предотвращайте деградацию mRNA, строго контролируя RNase в экспериментальной среде и расходных материалах.
Изучение кейса
Yaohai Bio-Pharma создала зрелую платформу процесса ко-транскрипционного закапирования, используя чистые аналоги каппа для непосредственного добавления структуры Cap1, избегая обратного закапирования. После стандартизированной предварительной обработки образцов и детекции капиллярным электрофорезом (CE) показатель закапирования мРНК зеленого флуоресцентного белка (eGFP) может достигать более 95%.
эффективность закапирования мРНК eGFP более 95%
МРНК eGFP и мРНК mCherry, подготовленные методом ко-транскрипционного закапирования, трансфектируют в клетки 293T соответственно, и через 48 часов наблюдается сильный флуоресцентный сигнал, что указывает на эффективное выражение мРНК в клетках 293T.
Выражение мРНК eGFP и мРНК mCherry в клетках 293T
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
