Что касается пакетной подготовки предшественников РНК, часто используемым методом является транскрипция in vitro (IVT). Реакция IVT использует линеаризованный плазмидный ДНК, содержащий промотор T7, в качестве шаблона и синтезирует предшественник РНК с нуклеозидными трифосфатами (NTP) в качестве субстрата при участии полимеразы РНК T7.
Методы циклизации in vitro включают химическую лигацию, ферментативную лигацию и метод переставленных интрон-экзон (PIE). Химическая лигация и ферментативная лигация подходят для циклизации более коротких РНК. Когда фрагмент больше 100 нт, скорость циклизации значительно снижается. В противоположность этому, метод нуклеазы на основе системы PIE может достигать циклизации последовательностей длиной 8 кб.
Под действием гуанозин-трифосфата (GTP) структура PIE претерпевает циклизацию внепреобразных последовательностей. В сочетании с рациональной стратегией повышения скорости циклизации компания Yaohai Bio-Pharma может достигать циклизации последовательностей до 4 кб с эффективностью более 80%.
Циклизация РНК in vitro протекает следующим образом:
Предшественник РНК синтезируется in vitro транскрипцией, и компонент PIE завершает самоперестройку под действием GTP для образования circRNA.
Детали услуг
| Процесс |
Детали услуги |
Срок доставки (рабочий день) |
| Транскрипция in vitro и циркуляция |
Подтверждение системы реакции |
1-2 |
| Реакции транскрипции in vitro и циклизации |
| Обработка RNase R |
| Оптимизация реакции |
Состав реакции, оптимизация времени |
2-5 |
Наши особенности
- Строгий дизайн и оптимизация тестов
Можно достичь циклизации РНК до 4 кб.
- Высокая эффективность циклизации
Через рациональную стратегию оптимизации последовательности можно достичь коэффициента циклизации более 80%.
С помощью строгого контроля РНаз в экспериментальной среде и расходных материалах有效地 предотвращается деградация РНК.
Изучение кейса
Циклизация и обогащение circRNA in vitro
На основе системы PIE компания Yaohai Bio-Pharma оптимизировала последовательность circRNA, с коэффициентом циклизации более 80%, определенным методом агарозного гель-электрофореза (AGE). Используя RNase R для обогащения circRNA, результаты электрофореза E-gel показывают, что линейный предшественник РНК переваривается, а после дальнейшей очистки большая часть nicked circRNA может быть удалена. Раствор для очистки разработан компанией Yaohai Bio-Pharma.
Циркуляция и обогащение circRNA in vitro
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
