Синтез пользовательского saRNA
Самоусиливающаяся РНК (saRNA), также известная как репликон РНК, кодирует последовательности транскрипции in vitro (IVT) мРНК и вирусные гены репликазы, полученные из альфа- или флавивирусов. Вирусные гены репликазы позволяют самоусилению мРНК, что приводит к увеличению экспрессии белка и минимальной необходимой дозе РНК по сравнению с неусиливающимися мРНК. Другим аспектом является то, что saRNA является относительно крупной молекулой (более 14 кб).
Yaohai Bio-Pharma разработала набор технологий синтеза мРНК для предоставления неусиливающейся мРНК и самоусиливающейся мРНК (1000 нт~14000 нт), таких как проектирование и оптимизация последовательностей, IVT, очистка, лиофилизация и инкапсуляция в липидные наночастицы (LNP). Все продукты выпускаются при строгом соблюдении стандартов контроля качества.
Рис.1 Структурные особенности мРНК IVT: традиционная, круговая и самоусиливающаяся мРНК.
Особенности последовательности самоусиливающейся мРНК
Автореплицирующаяся РНК состоит из четырех неструктурных белков (обозначенных как nsP1, nsP2, nsP3 и nsP4), которые происходят от альfavирусов, венесуэльского энцефаломиелита лошадей (VEEV). Среди них nsP1 проявляет двойную ферментативную активность, а именно GTазу и N7MTазу, тогда как nsP2 обладает RTPазной активностью, что критично для образования Cap 0 структуры путем закапывания IVT мРНК. Помимо этого, nsP2 выполняет функции протеазы и геликазы, способствуя сложной обработке всего комплекса nsP. Точная функция nsP3 остается неизвестной, однако она взаимодействует с различными белками хозяина, тем самым способствуя ослаблению противовирусного ответа организма.
Регион субгеномного промотора альfavируса (SGP) расположен перед геном интереса (GOI). Элемент SGP способствует началу транскрипции GOI, минуя чтение последовательности, кодирующей вирусные белки nsP.
Рис.2 Синтез и клеточные тесты eGFP saRNA платформы Yaohai Bio-Pharma RNASci.
Пользовательские решения saRNA
Протокол синтеза saRNA похож на mRNA: Синтез пользовательского mRNA
- Проектирование последовательности
- Подготовка плазмидного шаблона
- транскрипция in vitro (IVT)
- энзиматическое закрытие mRNA
- ко-транскрипционное закрытие mRNA
- очистка mRNA
- лиофилизация mRNA
- Энкапсуляция в ЛНП
- Анализ и испытания
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
