Значимость ассая активности mRNA
С быстрым развитием вакцин и терапевтических средств на основе mRNA требуется специальный набор методов анализа для тестирования активности (определения их биологической активности), который включает эффективность перевода mRNA. Эти методы обычно основаны на трансфекции клеток и функциональных ассаях целевого белка.
Yaohai Bio-Pharma предлагает ассай на основе клеток для веществ лекарственных препаратов mRNA или продуктов LNP, включая трансфекцию клеток (293T, HepG2, HeLa, K562, U937, Raw264.7 клетки и др.) и ассай ELISA или Западного блоттинга (WB).
Регуляторные требования к ассаям активности
Согласно соображениям ВОЗ о регулировании, «Эффективность каждой партии конечной вакцины должна определяться с использованием подходящего количественного и проверенного функционального метода. Потенциальные in vitro тесты на эффективность могут включать клеточные системы трансфекции или бесклеточные ассайи». А также USP рекомендует использовать «клеточный ассай» для тестирования эффективности mRNA, то есть выражение целевого белка.
Процедура
Шаг 1. Клеточная трансфекция с использованием mRNA или mRNA-LNP
Клетки культивируются и трансфицируются с помощью mRNA или mRNA-LNP. Подробнее, mRNA трансфицируется после смешивания с трансфекционным реагентом, тогда как mRNA-LNP напрямую трансфицируется в клетки. Через 24-48 часов проясняют супернатант, содержащий выработанный белок, путем центрифугирования.
Шаг 2. Функциональные тесты целевого белка
Выполняйте анализы ELISA или WB для оценки функционального связывания целевых белков.
Изучение кейса
Клеточные тесты активности образцов mRNA
Yaohai-BioPharma разработала метод клеточных тестов активности для mRNA, включающий культуральное выращивание клеток, трансфекцию клеток и функциональные анализы белков. Мы трансфектировали eGFP mRNA, mCherry mRNA, люциферазную mRNA, спайковую белковую mRNA в клетки 293T и обнаружили целевой белок через флуоресцентный, люминесцентный или окрашенный сигнал, WB, ELISA.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
