Les données de cartographie peptidique basées sur la chromatographie liquide et la spectrométrie de masse (LC-MS) fourniront une grande quantité d'informations sur la structure primaire et d'ordre supérieur des protéines natives et recombinantes, y compris la couverture des séquences d'acides aminés, les modifications post-traductionnelles (PTM, par exemple la glycosylation , oxydation, désamidation), liaisons disulfure, etc.
Yaohai Bio-Pharma propose des services d'analyse de cartographie peptidique de votre protéine cible par LC-MS, pour accélérer vos recherches sur la structure des protéines.
Nous avons été impliqués dans la caractérisation structurale des protéines de diverses grosses molécules, notamment les vaccins sous-unitaires recombinants, les nanobodies/VHH/anticorps à domaine unique (sdAbs), les fragments d'anticorps, les hormones/peptides, les cytokines, les facteurs de croissance (GF), les enzymes, les collagènes, etc.
Exigences réglementaires pour la cartographie peptidique
La directive ICHQ6B recommande : « La fragmentation sélective du produit en peptides discrets est réalisée à l'aide d'enzymes ou de produits chimiques appropriés et les fragments peptidiques résultants sont analysés par HPLC ou toute autre procédure analytique appropriée. Les fragments peptidiques doivent être identifiés autant que possible à l'aide de techniques telles que l'analyse de la composition en acides aminés, le séquençage N-terminal ou la spectrométrie de masse (MS). La cartographie peptidique de la substance active ou du produit médicamenteux (DP) à l’aide d’une méthode correctement validée est une méthode souvent utilisée pour confirmer la structure du produit souhaitée pour la libération des lots.
Méthodes analytiques
| Analyse |
Méthodologie |
| Cartographie peptidique |
Digestion des protéases et chromatographie liquide-spectrométrie de masse (LC-MS) |
Procédure analytique
1. Réduction et alkylation
Le but est de réduire les ponts disulfure et de bloquer le thiol libre généré. La réduction des ponts disulfure aide à ouvrir la structure protéique, ce qui rend la digestion protéolytique plus efficace. Cette étape brisera également les ponts entre les chaînes dans le cas de protéines multi-chaînes qui ont des ponts disulfure reliant les chaînes (par exemple les anticorps monoclonaux, les mAb).
2. Digestion de la protéine à l’aide d’enzymes
Le but est de décomposer la protéine en peptides. Nous avons choisi les enzymes sur la base de la séquence théorique de la protéine et de la connaissance de la digestion théorique de la protéine par les enzymes. En choisissant les enzymes de cette manière, on devrait obtenir la meilleure analyse de cartographie peptidique.
3. analyse des peptides digérés Utilisation de la chromatographie liquide haute performance en phase inverse en ligne avec détection ultraviolette (UV) et spectrométrique de masse par électrospray (LC/ES-MS).
Séparation des peptides basée sur la polarité par LC (phase inverse-LC)
Au fur et à mesure que le peptide est élué de la colonne LC, le spectromètre de masse génère des informations de masse ainsi que des informations sur les ions fragments, ce qui nous permet de déterminer les informations de séquence. Nous utilisons les informations de séquence pour confirmer l’identité du peptide et fournir des informations primaires.
Nous pouvons également générer des informations sur la fragmentation à partir des peptides lorsqu’ils entrent dans la source du spectromètre de masse depuis la colonne LC. Selon les exigences de l'étude, il s'agit soit de LC-MS/MS sélective, soit de non-sélectivité, ce qui peut être considéré comme une forme de MS tandem.
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