Les liaisons disulfure sont parfois appelées liaisons SS ou ponts disulfure. Les ponts disulfure affectent la bioactivité des produits biologiques, comme les peptides, les protéines et les anticorps.
Yaohai Bio-Pharma propose des services d'analyse des liaisons disulfure principalement basés sur la chromatographie liquide-spectrométrie de masse (LC-MS).
Nous avons été impliqués dans la caractérisation structurale des protéines de diverses grosses molécules, notamment les vaccins sous-unitaires recombinants, les nanobodies/VHH/anticorps à domaine unique (sdAbs), les fragments d'anticorps, les hormones/peptides, les cytokines, les facteurs de croissance (GF), les enzymes, les collagènes, etc.
Exigences réglementaires pour les liaisons disulfure
Il existe différents nombres et formations de ponts disulfure dans différents produits biologiques, qui doivent être pleinement évalués lors des études de caractérisation des protéines si la séquence d'acides aminés primaire attendue du produit contient l'acide aminé cystéine. Ceci est également requis dans le document réglementaire ICH Topic Q6B.
Méthodes analytiques
| Analyse |
Méthodologie |
| Liaisons disulfure |
Chromatographie Liquide-Spectrométrie de Masse (LC-MS) après digestion |
Pour obtenir les données nécessaires à l'évaluation complète des ponts disulfure et des thiols libres, les scientifiques de Yaohai Bio-pharma effectuent une cartographie peptidique après digestion avec une protéase spécifique. Ensuite, analysez en utilisant la spectrométrie de masse à ionisation LC/électrospray (ES-MS) en ligne et/ou LC/ES-MS/MS avant et après la réduction.
Yaohai Bio-pharma peut également effectuer le test d'Ellman, qui constitue une partie importante de toute évaluation de produit entièrement contenant de la cystéine. Dans le cadre du test d'Ellman, nous dérivatisons des sulfhydryles en utilisant (5,5'-dithio-bis-[acide 2-nitrobenzoïque]). Pour déterminer les niveaux de thiols libres, le produit résultant est analysé par spectrophotométrie UV à 412 nm.
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