Les protéines recombinantes voient souvent l'oxydation des chaînes latérales d'acides aminés exposées, telles que le tryptophane (Trp) et la méthionine (Met), modifiant les propriétés physicochimiques des protéines. Ces changements peuvent à leur tour contribuer à altérer les fonctions biologiques des protéines affectées, telles qu'une perte de liaison, une réduction de l'activité enzymatique ou une clairance étonnamment rapide. Les protéines sont des cibles importantes pour les réactions oxydatives car elles réagissent rapidement avec les oxydants et sont abondantes dans les cellules, les tissus extracellulaires et les fluides corporels.
Par conséquent, la surveillance de l’oxydation des protéines est essentielle au succès du développement biopharmaceutique.
Yaohai Bio-Pharma propose un service d'analyse de l'oxydation des acides aminés, qui vous permet de déterminer l'oxydation des acides aminés par chromatographie liquide-spectrométrie de masse (LC-MS).
Nous avons été impliqués dans la caractérisation structurale des protéines de diverses grosses molécules, notamment les vaccins sous-unitaires recombinants, les nanocorps/VHH/anticorps à domaine unique (sdAbs), les fragments d'anticorps, les hormones/peptides, les cytokines, les facteurs de croissance (GF), les enzymes, les collagènes, etc.
Exigences réglementaires pour l'oxydation des acides aminés
Selon les lignes directrices ICH Q6B, les formes oxydées peuvent être détectées et caractérisées par chromatographie, électrophorèse et/ou d'autres méthodes analytiques pertinentes (par exemple, chromatographie liquide haute performance (HPLC), électrophorèse capillaire, spectroscopie de masse, dichroïsme circulaire).
Méthodes analytiques
| Analyse |
Méthodologie |
| Oxydation des acides aminés |
LC-MS, chromatographie liquide haute performance en phase inversée (RP-HPLC) ou chromatographie par interaction hydrophobe Chromatographie liquide haute performance (HIC-HPLC) et spectrométrie de masse |
Procédures analytiques
1. Préparation des échantillons
2. LC-MS
3. L'analyse des données
Les résidus de tryptophane (Trp) sont particulièrement sujets à l'oxydation en raison de la forte réactivité de l'indole aromatique avec les espèces réactives de l'oxygène. L'oxydation du Trp nécessite une certaine exposition des résidus Trp qui sont normalement enfouis dans la structure tridimensionnelle de la protéine.
Cependant, lorsque les résidus Trp sont oxydés, ils peuvent se transformer en une variété de produits aux propriétés très différentes du Trp original. La voie la plus courante d’oxydation du Trp comprend la formation de N-formylkinurénine (différence de masse : +32).
Un autre acide aminé couramment oxydé est la méthionine. L'atome de soufre dans le résidu Met peut accepter un ou deux atomes d'oxygène conduisant à la formation de sulfoxyde (différence de masse : +16) ou de sulfone (différence de masse : +32), respectivement. Cette modification est relativement courante en raison de l’exposition superficielle généralement élevée du Met.
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