La désamidation des chaînes latérales de la glutamine et de l’asparagine est une modification courante en termes d’impact sur les propriétés des produits biopharmaceutiques protéiques. La désamidation peut se produire dans les résidus de glutamine, mais généralement à un rythme beaucoup plus faible. Les taux de désamidation sont influencés par la température, le pH, la structure protéique locale et les résidus aminoacyles adjacents.
Yaohai BioPharma propose un service de test de désamidation des acides aminés, qui vous permet de détecter la désamidation des acides aminés par chromatographie liquide-spectrométrie de masse (LC-MS).
Nous avons été impliqués dans la caractérisation structurale des protéines de diverses grosses molécules, notamment les vaccins sous-unitaires recombinants, les nanobodies/VHH/anticorps à domaine unique (sdAbs), les fragments d'anticorps, les hormones/peptides, les cytokines, les facteurs de croissance (CF), les enzymes, les collagènes, etc.
Exigences réglementaires pour la désamidation des acides aminés
Selon les lignes directrices ICH Q6B, les formes désamidées peuvent être détectées et caractérisées par des méthodes chromatographiques, électrophorétiques et/ou autres méthodes analytiques pertinentes.
Méthodes analytiques
| Analyse |
Méthodologie |
| Désamidation |
Chromatographie liquide-spectrométrie de masse (LC-MS) |
Procédures
par exemple, désamidation aspartique
1. Digestion enzymatique
2. LC-MS dans des conditions de chromatographie liquide haute performance (HPLC)
3. L'analyse des données
La désamidation de l'asparagine se produit via un intermédiaire succinimide (Suc), qui est sensible à la racémisation et à l'hydrolyse, donnant quatre isomères Asp, dont L-Asp, L-IsoAsp, D-Asp et D-IsoAsp.
En théorie, la désamidation Gln pourrait générer quatre isomères Glu correspondants grâce à un processus similaire à la désamidation Asn.
La spectrométrie de masse à haute résolution identifie facilement la différence de masse de 1 Da entre les peptides contenant Asn/Gln et leurs homologues désamidés correspondants Asp/Glu.
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