L'importance de la sélection de souches
La sélection d'hôtes appropriés est nécessaire pour le développement CMC des produits biologiques, ce qui détermine la qualité et la cohérence du produit et du processus de fabrication. L'objectif direct de la sélection d'hôte est de fournir une banque primaire de cellules (PCB) candidate, avec des niveaux élevés d'expression et une grande stabilité, tant en termes de stabilité par passage que de stabilité en stockage. La sélection d'un hôte approprié est nécessaire pour deux raisons principales :
- Premièrement, sélectionner l'hôte microbien avec un niveau d'expression élevé. Il existe plusieurs souches commerciales utilisées pour exprimer différents types de protéines, comme les protéines toxiques, solubles ou eucaryotes.
- Deuxièmement, écran l'hôte avec stabilité génétique. Le test de stabilité génétique est un point clé tout au long du cycle de vie de production. Il est suggéré que la haute stabilité génétique soit reconnue comme une autre caractéristique clé pour une souche appropriée.
Mots-clés : sélection de souche microbienne, criblage de souche microbienne, criblage à haut débit des bactéries ou levures, criblage de souche à haute production, criblage de souche hautement stable, criblage de souche génétiquement stable Application : médecine humaine, médecine vétérinaire, vaccins, biologie synthétique, produits biologiques moléculaires recombinaison, réactif biologique
Services de Criblage de Souches de Yaohai Bio-Pharma
Bénéficiant de plus de 10 ans d'expérience en CDMO dans les biologiques microbiens, nous soutenons le développement et la fabrication de diverses grandes molécules, y compris des vaccins à sous-unités recombinants, des particules ressemblant à des virus (VLP), des hormones (insuline, GLP-1, hormone de croissance), des cytokines (Interleukine-2/IL-2, IL-15, IL-21), des facteurs de croissance (EGF, FGF, NGF), des nan anticorps/anticorps à domaine unique (sdAbs), des enzymes, etc.
Nous avons accumulé une riche expérience dans la sélection de différents types de vecteurs plasmidiques et d'hôtes microbiens, y compris les bactéries Escherichia coli (E. coli), et levure Pichia pastoris (P. pastoris), Saccharomyces cerevisiae (S. cerevisiae), Hansenula polymorpha (H. polymorpha). Nous pouvons trouver le meilleur système d'expression pour vos biologiques uniques.
Nous avons collecté divers hôtes microbiens avec des sources claires et des certificats d'analyse standards, y compris E.Coli l'expression bactérienne et l'expression levurienne.
Détails du service
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Services
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Détails du service
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Calendrier minimum/jour
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Livraisons
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Construction de la souche (E. coli)
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Transformation de plasmide (multi-hôtes)
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5
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COA des hôtes commerciaux Rapport de construction de la souche
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Vérification par PCR
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Purification de la souche
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Préservation de la souche
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Construction de la souche (levure)
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Préparation de cellules de levure compétentes
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10
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Linéarisation du plasmide
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Transformation électrochimique
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Écran de résistance / Déficit nutritionnel
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Purification de la souche
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Préservation de la souche
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Écran d'hôte approprié
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Extraction d'ADN plasmidique ou génomique
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15 à 20
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Processus de dépistage de l'hôte COA des souches ingénierées
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Vérification par PCR, digestion par enzyme de restriction
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Séquençage de gènes cibles
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Dépistage des hôtes à haute expression
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Dépistage des hôtes avec stabilité génétique
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Préservation de la souche
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Étude de cas
Un hôte approprié améliore le niveau d'expression de la protéine de 2,5 fois.
Nous sommes mandatés pour développer des souches à haute production E. coli et nous avons essayé trois types d'hôtes commerciaux E. coli en fonction des caractéristiques de la protéine cible. Il a été démontré que les souches S1-1 et S1-2 (Fig A : Voie 1,2) augmentaient le niveau de protéine de 3,5 fois par rapport à la souche initiale du client (Fig A : Voie 3).
De plus, la souche S1-1 a montré une stabilité génétique élevée (Fig B), et elle a été reconnue comme souche candidate pour la banque primaire de cellules (PCB).
Caractéristiques de nos services
Expertise prouvée avec divers hôtes microbiens, par exemple, E. coli DH5α, TOP10, Trans10, BL21; P. pastoris SMD1168H, X-33, GS115, PichiaPink strain1/2/3/4; S. cerevisiae et H. polymorpha .
Nous sommes expérimentés en E. coli la sécrétion périmplasmique, l'expression soluble et par corps d'inclusion, ainsi que l'expression intracellulaire ou par sécrétion chez les levures. Nous n'ajoutons aucun antibiotique ou nous ajoutons des antibiotiques conformément aux directives réglementaires.
Nous établissons une plateforme de criblage à haut débit pour sélectionner des souches à haute production et stables parmi plus d'une centaine de souches candidates.
Il est garanti que le processus d'ingénierie et de criblage des souches est traçable, conformément à la Bonne Gestion des Données et des Enregistrements.
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