Détermination du poids moléculaire par LC-MS
Le poids moléculaire intact a toujours été reconnu comme une caractéristique importante des biologiques. L'analyse du poids moléculaire intact est utilisée pour démontrer les produits protéiques/peptidiques et vérifier les biologiques. La mesure du poids moléculaire est une exigence des lignes directrices réglementaires.
Yaohai Bio-Pharma propose une analyse du poids moléculaire intact sous des conditions natives, réduites et N-déglycosylées. Nous utilisons la chromatographie liquide-couplée à la spectrométrie de masse (LC-MS) pour déterminer le poids moléculaire intact.
Exigences réglementaires pour le poids moléculaire
Il est recommandé dans l'ICH Q6 que « le poids moléculaire (ou la taille) est déterminé en utilisant la chromatographie d'exclusion stérique, l'électrophorèse sur gel de polyacrylamide en présence de SDS (sous conditions réductrices et non réductrices), la spectrométrie de masse (MS) et d'autres techniques appropriées ».
Méthodes analytiques
| Analyse |
Méthodes |
| Poids moléculaire |
LC-MS / Chromatographie liquide / Spectrométrie de masse par électrospray (LC/ES-MS) des protéines natives, réduites ou N-déglycosylées ou des sous-unités |
Procédures analytiques
Poids moléculaire intact :
- Réalisations d'analyses LC-MS sur l'échantillon natif tel qu'il a été reçu.
- Analyse des données LC-MS.
Poids moléculaire réduit :
- Traitement de l'échantillon de protéine avec un agent réducteur approprié ;
- Réalisations d'analyses LC-MS sur la protéine réduite ;
- Analyse des données LC-MS.
Poids moléculaire N-déglycosylé :
- Retrait des N-glycanes avec une enzyme appropriée ;
- Effectuer un LC-MS sur la protéine N-déglycosylée ;
- Analyse des données LC-MS.
Poids moléculaire réduit et N-déglycosylé :
- Traitement de l'échantillon de protéine avec un agent réducteur approprié ;
- Retrait des N-glycanes avec une enzyme appropriée ;
- Effectuer un LC-MS sur la protéine réduite et N-déglycosylée ;
- Analyse des données LC-MS.
Poids moléculaire du sous-unité de protéine :
- Clivage de la sous-unité
- Effectuer un LC-MS sur la sous-unité de protéine
- Analyse des données LC-MS
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