Le profilage des N-glycanes est essentiel pour la production de biopharmaceutiques. Yaohai Bio-Pharma propose un service de profilage des N-glycanes en utilisant la Chromatographie liquide-Couplée à la Spectrométrie de masse (LC-MS) sur les glycanes libérés et étiquetés. Les étapes générales pour préparer un échantillon de N-glycanes incluent la digestion de la glycoprotéine (GP), la déglycosylation, la purification, l'étiquetage/derivatisation, et l'Extraction de Phase Solide (SPE).
Nous avons été impliqués dans la caractérisation structurale des protéines de diverses grandes molécules, y compris les vaccins à sous-unités recombinants, les nanocorps/VHHs/anticorps à domaine unique (sdAbs), les fragments d'anticorps, les hormones/peptides, les cytokines, les facteurs de croissance (FC), les enzymes, les collagènes, etc.
Exigences Réglementaires pour le Profilage des N-Glycanes
Conformément à la directive ICH Q6B, « pour les glycoprotéines, la teneur en glucides (sucres neutres, sucres aminés et acides sialiques) est déterminée. De plus, la structure des chaînes de glucides, le motif des oligosaccharides (profil antennaire) et les sites de glycosylation de la chaîne polypeptidique sont analysés dans la mesure du possible.
Méthode analytique
| Analyse |
Méthodes |
| Profilage des N-glycanes |
Analyse par Chromatographie liquide - Spectrométrie de masse (LC-MS) des glycans libérés et étiquetés |
Procédures
1. Libération enzymatique des glycans avec la Peptide N-Glycosidase F (PNGase F)
2. Dérivatisation des glycans libérés par le 2-aminobenzamide (2-AB)
3. Purification des N-glycans récoltés sur une colonne TSK Amide - 80 si de grandes quantités de tensioactifs, de sels non volatils ou de matériaux contenant des groupes aminés libres sont présents
4. Étiquetage par le 2-aminobenzamide (2-AB) fluorescent
5. Analyse LC-MS des N-glycans étiquetés
6ème. Analyse des données
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