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In-vitro-Transkriptprotokoll

Hallo. Haben Sie sich schon einmal gefragt, wie Wissenschaftler eine RNA klonen können? RNA ist dieses spezielle Molekül, das wir in unseren Zellen finden und das eine Menge Dinge tut, um Proteine ​​herzustellen, und die Proteine ​​sind da, damit unser Körper all die richtigen Dinge tun kann. In dieser Folge werden wir einen Rundgang durch das weitaus merkwürdigere Protokoll machen, das von Forschern verwendet wird: In-vitro-Transkript. Und das bedeutet nichts weiter, als dass Wissenschaftler RNA nehmen und eine große Menge davon in einem Reagenzglas (das ist dieses kleine Gefäß, das Labore verwenden) herstellen, also gehen wir hier auf jeden Schritt ein. 

Nachdem ich meinen vorherigen Beitrag fertiggestellt hatte, wurde mir klar, dass der letzte vielleicht ein wenig trocken war, also mach mit beim Spaß im Nasslabor. Also, um der Form treu zu bleiben, jetzt, da du wirklich auf dem Spaßzug (sic RNA-Herstellung) bist: Welche Reagenzien und welche werden für deine EF benötigt?? Um dies zu erreichen, benötigen wir spezielle Proteine, sogenannte Enzyme, identisch mit Yaohais Produkt Rekombinante Midkine-Herstellung. Es katalysiert die chemischen Reaktionen, diese Enzyme helfen beim Abbau. Jetzt brauchen wir also nur noch unser Stück DNA. Diese Funktion ist die DNA, die wir als Vorlage verwenden, um sie für unsere RNA zu kopieren. Zusätzliche regulatorische Sequenzen in der RNA, nämlich Nukleotide, werden ebenfalls benötigt. Diese Nukleotide sind wie winzige Bausteine, die zusammengesetzt werden müssen, um die RNA zu bilden. Wir verwenden auch kurze Röhrchen mit kleinem Durchmesser, um die Geschmacksbewertung in andere zu kneten. Schließlich brauchen wir eine Maschine (einen Thermocycler), die sicherstellt, dass unsere Reaktionen bei der richtigen Temperatur stattfinden. Darüber hinaus benötigen wir möglicherweise einige Werkzeuge und Produkte für bestimmte Experimente.

Maximierung von Ausbeute und Reinheit bei In-vitro-Transkriptionsverfahren

Hier gehen die Dinge auseinander, wir haben einen RNA-Strang und jetzt möchten wir mehr Kopien davon haben, auch die Herstellung konjugierter VLP-Impfstoffe Entwickelt von Yaohai. Dies wird durch die Verwendung eines anderen Enzyms erreicht: T7-RNA-Polymerase. Dieses einzigartige Enzym erkennt beispielsweise bestimmte Bereiche innerhalb der RNA. Ein springender Kegel, um im weiteren Verlauf viele weitere RNA-Kopien zu erstellen. An diesem Punkt wird durch die T7-RNA-Polymerase dem RNA-Strang mehr hinzugefügt, bis eine Transkriptmasse erstellt wurde oder bis wir ihr sagen, dass sie aufhören soll. 

Nachdem wir die RNA so weit wie möglich isoliert haben, scrollen Sie weiter nach unten, um zu sehen, wie Sie die RNA reinigen und für die zukünftige Verwendung aufbewahren können. Rhoades: Einige dieser Methoden sind in Bezug auf die Isolierung von RNA etwas extremer – Sie würden das nicht immer verwenden, aber manchmal ist es für bestimmte Arten von Experimenten erforderlich. Sobald unsere RNA frei von jeglichen Verunreinigungen ist, kann sie gefroren gelagert werden. Auf diese Weise ist sie sicher und wir können sie später in den verschiedenen Experimenten verwenden.

Warum sollten Sie sich für das In-vitro-Transkriptprotokoll von Yaohai entscheiden?

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