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HPLC-basierte circRNA-Reinigung

Zirkuläre RNA oder circRNA ist eine spezielle Art von RNA, die eine andere Form hat. Während normale RNA ein lineares, geradliniges Erscheinungsbild hat, ist circRNA schleifenförmig. CircRNAs – ein Typ, dessen Struktur entscheidend ist, da sie normalerweise in großen Mengen vorkommen und an vielen wichtigen zellulären Prozessen beteiligt sind. Unter anderem regulieren sie, wie unsere Gene exprimiert werden, was alles von den Wachstumsmustern unseres Körpers bis hin zu unserer Reaktion auf Krankheiten beeinflussen kann. CircRNAs sind für Wissenschaftler von großem Interesse; ein besseres Verständnis von ihnen kann Aufschluss darüber geben, wie Krankheiten entstehen und neue therapeutische Ansätze identifizieren. Es gibt jedoch ein Problem: circRNAs sind sehr klein und in den von Wissenschaftlern untersuchten Proben tendenziell in sehr geringen Mengen vorhanden. Dies macht es schwierig, genügend circRNA für die Forschung zu gewinnen.

Bevor die endgültige Grundlage für die Sammlung von circRNA geschaffen wurde, wurde eine bewährte Methode namens Hochleistungsflüssigkeitschromatographie, kurz HPLC, verwendet. HPLC ist eine vielseitige Technik zum Trennen verschiedener Moleküle nach ihren physikalischen und chemischen Eigenschaften. Dabei werden die Moleküle nach Größe und Form getrennt. Da circRNAs sehr klein sind, können sie leicht zwischen den Tausenden anderer Moleküle in einer Probe verloren gehen. Das bedeutet, dass circRNAs durch den Einsatz effektiver Methoden wie der Größenausschlusschromatographie (SEC), einer HPLC-Technik, von anderen RNAs, Proteinen und exogenen Rückständen, die möglicherweise in der Probe enthalten waren, getrennt werden können. Dies ist eine wichtige Trennung für Wissenschaftler, die die circRNA für ihre Forschung isolieren müssen.

HPLC-basierte circRNA-Isolierung für eine genaue nachfolgende Analyse

Nachdem HPLC bei der Reinigung von circRNA geholfen hat, muss sie von Wissenschaftlern gründlich analysiert werden, um ihre Funktion in uns zu verstehen. CircRNAs haben sich als wichtige Moleküle erwiesen, die an mehreren biologischen Funktionen beteiligt sind. Daher ist ein gründliches Verständnis der verschiedenen circRNA-Typen und -Rollen entscheidend, um ihre Beteiligung an verschiedenen Krankheiten zu entschlüsseln. Wissenschaftler kennen die Sequenz der gereinigten circRNA nicht, müssen sie aber kennen, um die Funktionen dieser Rollen zu entdecken. Dazu verwenden sie Techniken wie die Reverse-Transkriptase-PCR (RT-PCR). Mit RT-PCR erstellen Wissenschaftler zusätzliche Kopien der circRNA, damit sie diese gezielter untersuchen können. Sie sind oft aufschlussreich und liefern durch die Analyse der circRNA-Sequenzen Informationen darüber, wie diese Moleküle funktionieren und was sie in unseren Zellen bewirken.

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