Tilpasning af saRNA Syntese
Selv-forstærkende mRNA (saRNA), også kendt som replicon RNA, kodere for in vitro-transkription (IVT) mRNA-sekvenser og virale replicase-gener fra alphavirus eller flavivirus. De virale replicase-gener tillader selv-forstærkningen af mRNA, hvilket resulterer i øget proteinet udtryk og en minimumskrav til RNA-dosis i forhold til ikke-forstærkende mRNAs. Et andet aspekt er, at saRNA er et relativt stort molekyle (mere end 14 kb).
Yaohai Bio-Pharma har etableret en række mRNA-synsteknologier for at levere ikke-forstærkende mRNA og selv-forstærkende mRNA (1000 nt~14000 nt), såsom sekvensdesign og -optimering, IVT, rensetning, lyofilisering og lipid nanopartikel (LNP)-indpakning. Alle produkter udløses under strenge kvalitetskontrolstandarder.
Fig.1 Strukturelle egenskaber ved IVT mRNAs: Konventionel, cirkulær og selv-forstærkende mRNA.
Sekvensegenskaber ved selv-forstærkende mRNA
Selvforstærkende RNA består af fire ikke-strukturelle proteiner (betegnet som nsP1, nsP2, nsP3 og nsP4), som er afledt fra alphavirusser, specifikt venezuelansk hesteencefalitisvirus (VEEV). blandt disse udviser nsP1 to enzymatiske aktiviteter, nemlig GTase og N7MTase, mens nsP2 besidder RTPase-aktivitet, som er afgørende for at sætte IVT-mRNA til Cap 0-struktur. Desuden fungerer nsP2 som en protease og helikase, hvilket letter den komplekse bearbejdning af hele nsP-kompleks. Den nøjagtige funktion af nsP3 forbliver ukendt, men det interagerer med forskellige værtscelleproteiner, hvilket bidrager til at svække værtsens antivirale respons.
En alphavirus subgenomisk promotor (SGP)-region placeres før genet af interesse (GOI). SGP-elementet gør det muligt at initiere GOI-transkription ved at omgå læsningen af sekvensen, der kodere for virale nsP-proteiner.
Fig.2 Syntese og celletests af eGFP saRNA fra Yaohai Bio-Pharma RNASci Platform.
Tilpassede løsninger af saRNA
Synteseprotokollen for saRNA er lignende med mRNA: Tilpasset mRNA Syntese
- Sekvensdesign
- Plasmidtemplateforberedelse
- in vitro transkription (IVT)
- mRNA Enzymatisk Capping
- mRNA Ko-transkriptionscapping
- mRNA Renning
- mRNA Lyophilisering
- LNP Indkapsling
- Analyse og testing
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
