Pozdravljeni. Ste se kdaj vprašali, kako lahko znanstveniki klonirajo RNK? RNA je ta posebna molekula, ki jo najdemo v naših celicah in naredi kup stvari za izdelavo beljakovin, beljakovine pa so tam, da lahko naše telo naredi vse prave stvari. V tem delu bomo naredili sprehod skozi veliko bolj nenavaden protokol, ki ga uporabljajo raziskovalci: in vitro prepis. In vse to pomeni, da znanstveniki jemljejo RNK in jo naredijo veliko v epruveti (ki jo uporabljajo laboratoriji v tej majhni posodi), zato poglejmo tukaj vsak korak.
Ko sem končal svojo prejšnjo objavo, sem ugotovil, da je bila zadnja morda malo suhoparna objava o zabavi v mokrem laboratoriju; torej, v skladu s formo zdaj, ko ste dobro in resnično na zabavnem vlaku (sic izdelava RNA): Katere reagente in c boste potrebovali za vaš EF?? Da bi to dosegli, bomo potrebovali posebne beljakovine, imenovane encimi, enake Yaohaijevemu izdelku Proizvodnja rekombinantne Midkine. Katalizira kemične reakcije, ti encimi pomagajo pri razgradnji. Torej zdaj potrebujemo samo naš delček DNK. Ta funkcija je DNK, ki jo uporabljamo kot predlogo za kopiranje naše RNK. Potrebna so tudi dodatna regulatorna zaporedja v RNA, namreč nukleotidi. Ti nukleotidi so kot drobni gradniki, ki jih je treba sestaviti, da nastane RNK. Uporabljamo tudi kratke epruvete majhnega premera, ki prekrivajo ocenjevanje okusa. Nazadnje potrebujemo stroj (termocikler), ki poskrbi, da so naše reakcije na pravi temperaturi. Poleg tega bomo morda potrebovali nekaj orodij in izdelkov za določene poskuse.
Tukaj se torej stvari razhajajo, imamo eno verigo RNA in zdaj želimo imeti več njenih kopij, tudi Proizvodnja konjugiranih cepiv VLP razvil Yaohai. Način, kako doseči uporabo drugega encima; T7 RNA polimeraza. Ta edinstveni encim na primer prepozna posebna področja znotraj RNA. skakajoči stožec za izdelavo veliko več kopij RNK v postopku. Na tej točki bo RNK polimeraza T7 dodala še več verigi RNK, dokler ne bo ustvarjena masa zapisa ali dokler ji ne rečemo, naj se ustavi.
Ko smo RNA čim bolj izolirali, se pomaknite nižje navzdol, da vidite, kako očistiti in shraniti RNA za prihodnjo uporabo. Rhoades: Nekatere od teh metod so nekoliko bolj skrajne v smislu izolacije RNA - tega ne bi vedno uporabili, vendar je včasih za nekatere vrste poskusov to potrebno. Ko je naša RNA brez kakršnih koli onesnaževal, jo lahko shranite zamrznjeno. Tako je to varno in ga lahko kasneje uporabimo v različnih poskusih.
Kakovost vhodnega materiala: poskrbite, da bo vaša predloga DNK čista in da ni vsa zgorela. Dodate lahko tudi sveže rekonstituirane nukleotide in na novo odmrznjene encime, da povečate možnosti za uspešen poskus.
Pogoji natančnega uravnavanja Vsi encimi in njihovi nukleotidi delujejo bolje pri določeni temperaturi in pH v vašem telesu, pa tudi pri Yaohaijevih Rdeča fluorescentna mRNA. Zdaj nekoliko prilagodite nianse med pogoji, dokler ne pridete do tistega, kjer je ključ za vašo edinstveno nastavitev.
Reverzna transkriptaza je nenavaden encim, saj naredi kopijo DNK iz molekule RNK. Uporabili smo obe DNK in šablono DNK (cDNK) kot vhod za našo in vitro transkriptno metodo za generiranje RNK. Vendar bi znanstveniki v večini poskusov želeli prepisati DNK v RNK. Povratna transkripcija je, kjer dobi svoje ime enako kot Testiranje porazdelitve mRNA poli-A izdelal Yaohai. Je neprecenljivo orodje v vsej znanosti – od preučevanja molekul RNK znotraj celic do izdelave komplementarnih verig DNK za nadaljnje poskuse.
Eksperimenti v resničnem življenju, v katerih je RNA eno najpogosteje uporabljenih molekularnih orodij, skupaj z Yaohaijevim izdelkom Proizvodnja cepiva VLP v E. coli. Kvantitativni testi: ti testi lahko razkrijejo količino katere koli specifične molekule, prisotne v vzorcu. Znanstveniki lahko na primer sintetizirajo in vitro pripravo transkripta kopij RNA, pridobljenih iz ciljnega gena, ki se nahaja v celici. Diagnostika lahko nato opravi test za te kopije, če so. Če iščete RNA, lahko diagnostika izvede verižno reakcijo s polimerazo (PCR), da pomnoži te kopije v vzorcu. To omogoča znanstvenikom, da vidijo, kako se geni izražajo na celicah, in celo omogoča nekatere izjemno zmogljive teste, kot je prisotnost bakterijske ali virusne okužbe, in diagnosticiranje genetskih motenj.
in vitro Transcript Protocol je vodilni v mikrobnih bioloških zdravilih CDMO. Naš poudarek je bil na cepivih in terapevtikih, proizvedenih z mikrobi, ki so primerni za upravljanje zdravja ljudi, veterinarjev in hišnih ljubljenčkov. Imamo najsodobnejše RD platforme in proizvodno tehnologijo, ki pokrivajo celoten postopek od razvoja mikrobnih sevov in celične banke do razvoja procesov in metod do komercialne in klinične proizvodnje, ki zagotavlja uspešno dostavo inovativnih rešitev. Sčasoma smo si nabrali ogromno znanja o biopredelavi na osnovi mikrobov. Več kot 200 projektov je bilo uspešno zaključenih, našim strankam pa pomagamo pri izpolnjevanju predpisov, kot sta ameriška FDA in EU EMA. Pomagamo jim tudi pri navigaciji po Avstraliji TGA in Kitajski NMPA. Naše strokovno znanje in bogate izkušnje nam omogočajo, da se hitro odzovemo na zahteve trga in nudimo storitve CDMO po meri.
Yaohai Bio-Pharma ima izkušnje s proizvodnjo bioloških zdravil, ustvarjenih iz protokola transkripta in vitro. Ponujamo prilagojene RD in proizvodne rešitve, hkrati pa zagotavljamo, da ni tveganj. Vključeni smo bili v različne modalitete, kot so rekombinantna podenotna cepiva, peptidni hormoni, citokini, rastni faktorji, encimi protiteles z eno domeno, plazmidna DNA MRNA in še veliko več. Smo specialist za številne mikroorganizme, vključno z zunajceličnim in znotrajceličnim izločanjem kvasovk (donos do 15 g/L) ter intracelularnimi topnimi in inkluzijskimi telesci bakterij (donos do 10 g/L). Ustvarili smo tudi fermentacijsko platformo BSL-2 za ustvarjanje bakterijskih cepiv. Osredotočeni smo na izboljšanje procesov, povečanje donosov izdelkov in zmanjšanje proizvodnih stroškov. Z močno tehnološko ekipo lahko zagotovimo hitro in zanesljivo izvedbo projekta, ki bo vaš izdelek hitreje prinesel na trg.
Yaohai Bio-Pharma, 10 najboljših proizvajalcev bioloških izdelkov, je specializirano za mikrobno fermentacijo. Zgradili smo sodoben objekt z robustnimi zmogljivostmi RD in napredno opremo. Imamo pet proizvodnih linij zdravilnih učinkovin, ki ustrezajo zahtevam GMP za mikrobno fermentacijo in čiščenje. Imamo tudi dve avtomatizirani polnilni liniji za vložke, viale in napolnjene injekcijske brizge. Fermentacijske lestvice, ki so na voljo za uporabo, segajo od in vitro protokola transkripta do 2000L. Specifikacije za polnjenje viale segajo od 1 ml do 25 ml. Specifikacije polnjenja napolnjene brizge ali vložka se gibljejo med približno 1-3 ml. Naš proizvodni obrat, skladen s cGMP, zagotavlja stalno dobavo kliničnih vzorcev in komercialnih izdelkov. Naša tovarna proizvaja velike molekule, ki se pošiljajo po vsem svetu.
Yaohai BioPharma je 10 najboljših mikrobnih CDMO, ki vključuje in vitro transkriptni protokol in regulativne zadeve. Imamo sistem vodenja kakovosti, ki je v skladu z veljavnimi standardi GMP in svetovnimi predpisi. Naša ekipa regulativnih strokovnjakov je vešča globalnih regulativnih okvirov za pospešitev bioloških izstrelitev. Zagotavljamo sledljive proizvodne procese kakovostnih izdelkov ter skladnost s pravili ameriške FDA in EU EMA. Zadovoljna sta tudi avstralska TGA in kitajska NMPA. Yaohai BioPharma je uspešno opravila presojo na kraju samem kvalificirane osebe Evropske unije (QP) za naš sistem kakovosti GMP in naš proizvodni obrat. Poleg tega smo opravili prve certifikacijske presoje sistema vodenja kakovosti ISO9001, sistema upravljanja okolja ISO14001 in sistema upravljanja varnosti in zdravja pri delu ISO45001.