Osnova enkapsulacije je načrtovanje in razvoj dostavnega sistema. Dobro zasnovan dostavni sistem omogoča, da molekule circRNA vstopijo v telo, ne da bi jih razgradili encimi RNA, nato pa se učinkovito dostavijo na ciljno mesto, prečkajo celično membrano in se sprostijo znotrajcelično.
Lipidni nanodelci (LNP) so najboljši sistem dostave, ki je na voljo, s prednostmi pri inkapsulaciji, izražanju in vivo in varnosti in vivo v primerjavi z drugimi sistemi dostave. LNP s fragmenti nukleinske kisline se zlahka pogoltnejo v celice in tvorijo znotrajcelična telesa. Ko vstopi v celico, kislo okolje znotrajceličnega telesa protonira in pozitivno nabije glavo ioniziranega lipida, tako se zlije z notranjo membrano znotrajceličnega telesa in sprosti ciljno nukleinsko kislino v celico za delovanje.
Storitev Yaohai Bio-Pharma circRNA se še naprej izboljšuje in lahko zagotovi storitev enkapsulacije circRNA-LNP za optimizacijo ustreznih kritičnih procesnih parametrov in izboljšanje doslednosti in ponovljivosti proizvodnje zdravil circRNA.
Proces | Podrobnosti o storitvi | Dobavni rok (dan) | Rezultat |
inkapsulacija circRNA-LNP | Predobdelava materiala in tekočine | 2 | circRNA-LNP zdravilo (DP) |
Mikrofluidna naprava za mešanje | |||
Filtracija tangencialnega toka | 1 | ||
Sterilizacijska filtracija | |||
nadzor kakovosti circRNA-LNP | Učinkovitost inkapsulacije | 1 | Poročilo o preskusu |
Velikost delcev in indeks polidisperznosti | |||
Zeta potencial |
Hitra sinteza, visoka učinkovitost raziskav in razvoja ter vnaprej optimizirane rešitve;
Razmerje inkapsulacije lahko doseže več kot 90%;
Velikost lipidnih nanodelcev je mogoče nadzorovati s spreminjanjem hitrosti in razmerja vbrizgavanja tekočine;
Izdelki circRNA-LNP so potrjeni s celično ekspresijo in vitro in lahko učinkovito izražajo ciljni protein.
Pripravijo se vzorci LNP-eGFP circRNA in njihovi različni odmerki (1 ug, 2 ug in 4 ug) se neposredno transfektirajo v celice 293T, da se preveri, ali lahko izražajo ciljni protein. Po 48 urah transfekcije je mogoče opaziti jasen fluorescentni signal in obstaja učinek stopnjevanja odmerka intenzivnosti fluorescence.
Lipo-circ_eGFP, sestavljen iz liposoma in neinkapsulirane eGFP circRNA, je vzet kot kontrola.