Kar zadeva množično proizvodnjo mRNA, je in vitro transkripcija (IVT) učinkovitejša in zrelejša metoda. Reakcija IVT sprejme linearizirano plazmidno DNA, ki vsebuje promotor T7 kot predlogo, mRNA pa se sintetizira z nukleozid trifosfati (NTP) kot substrati v prisotnosti polimeraze T7 RNA.
Modifikacija nukleotidov je preboj v raziskovanju mRNA, kjer znotrajcelični senzorji RNA prepoznajo nespremenjene molekule mRNA, da aktivirajo prirojeno imunost. Za premisleke o imunogenosti mRNA in vivo in učinkovitosti prevajanja postopek IVT običajno uporablja določene vrste modificiranih NTP, običajni modificirani nukleotidi pa so psevdouridin (Ψ), N1-metil-psevdouridin (N1Ψ) in 5-metilcitozin (5mC).
In vitro transkripcijski proces mRNA
Reakcijski diagram in vitro transkripcije (IVT).
Storitve Podrobnosti
Izbirna storitev | Podrobnosti o storitvi | Dobavni rok (delovnik) |
Transkripcija in vitro (IVT) | IVT, In vitro transkripcija | 1 |
| Nukleotidne modifikacije (Ψ/N1Ψ/5mC itd.) |
| Odstranitev predloge DNA (DNase I) |
Optimizacija stanja IVT - neobvezno | Oblikovanje in optimizacija reakcijskih komponent IVT | 2-5 |
Naše lastnosti
- Raznolike strategije spreminjanja nukleotidov
Izboljšajte stabilnost mRNA in izražanje beljakovin in vivo.
- Strogo načrtovanje in optimizacija testov
Doseči je mogoče pripravo fragmentov mRNA do 10 kb.
Z optimizacijo reakcijskih pogojev IVT je hitrost transkripcije do 1:200.
Strog nadzor nad RNazo prek eksperimentalnega okolja in potrošnega materiala lahko učinkovito prepreči razgradnjo mRNA.
Študija primera
Trenutni reakcijski sistem IVT je približno optimiziran za sintetične sisteme z dolžino približno 100 nt, ne za mRNA poljubne dolžine. Daljše kot je zaporedje mRNA, težje ga je prepisati in bolj je nagnjeno k razgradnji.
Za pripravo prilagojenih sekvenc mRNA z dolžino približno 10 kb je Yaohai Bio-Pharma uspešno pripravila visokokakovostne vzorce z visokim transkripcijskim razmerjem 1:135 in pridobila 135 μg prvotno prečiščenih produktov mRNA po 1 μg lineariziranega plazmida. je bil prepisan in vitro s strogim eksperimentalnim načrtom, neprekinjenim optimiziranjem reakcijskih pogojev in strogim nadzorom RNaze.
Identifikacija mRNA (elektroforeza v agaroznem gelu)
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
