Krožna mRNA (circRNA) se pogosto uporablja pri preučevanju funkcij genov ali beljakovin. Medtem je priljubljen pri razvoju profilaktičnih in terapevtskih bioloških zdravil, podobno kot mRNA.
Yaohai Bio-Pharma je vzpostavil nabor tehnologij za sintezo circRNA za zagotavljanje visokokakovostne RNA, kot so zasnova in optimizacija zaporedja, in vitro transkripcija (IVT), cirkularizacija/ciklizacija, čiščenje in inkapsulacija lipidnih nanodelcev (LNP). Vsi izdelki so izdani v skladu s strogimi standardi nadzora kakovosti (QC).
V primerjavi z linearno mRNA je krožna RNA (circRNA) bolj stabilna po strukturi in je glavna vroča točka v trenutnih raziskavah zdravil nukleinske kisline. Ima široko paleto aplikacij na različnih področjih, bodisi kot kodirajoča circRNA ali nekodirajoča circRNA, vključno s profilaktičnimi cepivi za nalezljive bolezni, terapevtskimi onkološkimi cepivi, terapevtskimi onkološkimi zdravili, nadomestnim zdravljenjem z beljakovinami, regenerativno medicino, celično in gensko terapijo (CGT) , vloga molekularne gobe in RNA aptamer.
Proces | Izbirna storitev | Podrobnosti o storitvi | Dobavni rok (dan) |
Oblikovanje in optimizacija zaporedja circRNA | Oblikovanje in optimizacija zaporedij kodiranja | Optimizacija CDS kodona | 1 |
Oblikovanje in optimizacija nekodirajočih zaporedij | Zaporedje intronov in eksonov, oblikovanje in optimizacija homologne roke in distančnika | 1-2 | |
Priprava krožnega plazmida | Genska sinteza | Gene Synthesis (Tretja oseba) | 7-10 |
Plazmidno pomnoževanje | Plazmidno pomnoževanje | 2 | |
Ekstrakcija plazmida | |||
Priprava lineariziranega plazmida | Linearizacija in čiščenje plazmidov | Linearizacija plazmidov | 1 |
Linearizacija Čiščenje DNK | |||
Transkripcija in ciklizacija in vitro | Transkripcija in ciklizacija in vitro | Reakcije transkripcije in ciklizacije in vitro | 1-2 |
RNaza R Prebava | |||
Optimizacija-neobvezno | Sestava reakcije, optimizacija časa | 2-5 | |
čiščenje circRNA | Konvencionalna metoda čiščenja | Padavine litijevega klorida | 1 |
Čiščenje z magnetnimi kroglicami | 1 | ||
Visoko čisto čiščenje circRNA | Preparativna tekočinska kromatografija visoke ločljivosti (HPLC) | 1-2 | |
Izmenjava medpomnilnika | Ultrafiltracija | 1 | |
liofilizacija circRNA | Vzorčno polnjenje | Polnjenje | 2-3 |
Liofilizacija | Predzamrzovanje | ||
Primarno sušenje (sublimacija) | |||
Sekundarno sušenje (desorpcija) | |||
enkapsulacija circRNA-LNP | Enkapsulacija LNP | Predobdelava materiala in tekočine | 2 |
Mikrofluidna naprava za mešanje | |||
Izmenjava medpomnilnika | Filtracija tangencialnega toka | 1 | |
Sterilizirajte | Filtracija | ||
Kontrola kakovosti plazmidne DNA | Koncentracija/čistost | Ultravijolična (UV) spektrofotometrija | 1-2 |
Plazmidna konformacija | Elektroforeza v agaroznem gelu (AGE) | ||
Kapilarna elektroforeza (CE) - neobvezno | |||
Identifikacija plazmida | Identifikacija restrikcijskega encima/AGE | ||
Kontrola kakovosti circRNA | Koncentracija/čistost | Ultravijolična (UV) spektrofotometrija | - |
Čistost | Elektroforeza v agaroznem gelu (AGE)/E-gel | 0.5 | |
HPLC-izbirno | 1 | ||
Kontrola kakovosti circRNA-LNP | Učinkovitost enkapsulacije | Metoda RiboGreen | 1 |
Velikost delca | Dinamično sipanje svetlobe (DLS) | 1 | |
Indeks polidisperznosti | Dinamično sipanje svetlobe (DLS) | 1 | |
Zeta potencial | Dinamično sipanje svetlobe (DLS) | 1 | |
Test moči na osnovi celic | Transfekcija celic | Presaditev celic, transfekcija celic | 4 |
Odkrivanje ciljnih beljakovin | Opazovanje fluorescence, Western Blot/ELISA | 1-3 |
Transfektirali smo okrepljeno zeleno fluorescenčno proteinsko circRNA (eGFP circRNA), mCherry circRNA, luciferazno circRNA v celice 293T in odkrili ciljni protein s fluorescenco, luminescentnim ali barvnim signalom, western blotom (WB), encimsko vezanim imunskim testom (ELISA).
Testi moči na celicah vzorcev circRNA Yaohai Bio-Pharma