Yaohai Bio-Pharma pripravi circRNA na podlagi sistema PIE (poravnava eksonov in intronov), ki se zanaša na funkcijo samospojitve intronov tipa I, da doseže ciklizacijo RNA. Struktura PIE je zasnovana z uporabo gena T4 td ali ribjega prekurzorskega gena tRNA, razporeditev pa je naslednja:
Intron RNA in podporni fragment eksona sta razdeljena na dva dela (5' terminal in 3' terminal), kjer se 5' terminalno zaporedje prenese na rep ciljnega zaporedja, 3' terminalno zaporedje pa se vstavi v sprednji del ciljno zaporedje, ciljno gensko zaporedje pa je vstavljeno na sredino.
Pod katalizo GTP struktura PIE vodi do ciklizacije zaporedij, ki niso introni. V kombinaciji z razumno strategijo izboljšanja stopnje ciklizacije lahko Yaohai Bio-Pharma doseže ciklizacijo zaporedij do 4 kb s stopnjo ciklizacije več kot 80 %.
Slika 1. In vitro kroženje circRNA na podlagi sistema PIE
Storitve Podrobnosti
| Proces | Izbirna storitev | Podrobnosti o storitvi | Dobavni rok (delovnik) |
| načrtovanje in optimizacija zaporedja circRNA | Oblikovanje in optimizacija kodirnih sekvenc | Poravnava zaporedja CDS Optimizacija CDS kodona | 1 |
| Oblikovanje in optimizacija nekodirajočih zaporedij | Oblikovanje in optimizacija sekvenc intronov in eksonov Zasnova in optimizacija homolognega zaporedja rok Oblikovanje in optimizacija zaporedja distančnikov | 1-2 |
Skupne strategije za načrtovanje zaporedja mRNA
| Komponente CircRNA | Biološke funkcije | Optimizacijske strategije |
| Dvoterminalne intronske in eksonske sekvence | GTP katalizirano samospojitev introna za ciklizacijo sekvenc zunaj introna. | Zasnovan v skladu z genom T4 td ali prekurzorskim genom tRNA ribjega olja. |
| Kodiranje | IRES | Notranje mesto za prepoznavanje ribosoma, ki uravnava prevajanje circRNA. | Preverjanje sekvenc notranjih ribosomskih vstopnih mest (IRES) iz različnih virusnih virov, npr. virov EMCV, CVB3. |
| CDS | Regije, ki kodirajo proteine, zaporedja, ki kodirajo antigene, protitelesa ali druge funkcionalne proteine. | Optimizacija kodona poveča stopnjo prevajanja; določeni neoptimalni kodoni lahko igrajo vlogo pri zvijanju beljakovin. |
| Nekodiranje | Nekodirajoča zaporedja | Ciljajte na miRNA ali proteine za uravnavanje genov ali proteinov. | Usmerjanje na specifična vezavna mesta za miRNA ali proteine lahko ponovi sekvence vezavnega mesta. |
Naše lastnosti
- Optimiziran PIE ciklizacijski sistem Kombinacija z razumnimi optimizacijskimi strategijami za doseganje stopnje ciklizacije več kot 80 %;
- Vrhunska ekipa za optimizacijo CDS Sodelovanje s strokovno ekipo algoritmov AI za dokončanje optimizacije kodonov regije CDS;
- Zrelo in popolno procesno circRNA je mogoče doseči z visoko učinkovitostjo ciklizacije, visoko stabilnostjo in visoko učinkovitostjo prevajanja.
Študija primera
Yaohai Bio-Pharma je lansirala kontrolni produkt, izboljšan zeleni fluorescentni protein (eGFP) circRNA, ki temelji na sistemu PIE za doseganje ciklizacije RNA.
Z uporabo običajnega transfekcijskega reagenta se eGFP circRNA transfektira v celice 293T in eGFP (zeleni) fluorescenčni signal je mogoče zaznati po 24 urah, ki se bo okrepil po 48 urah. Fluorescenčni signal je še vedno mogoče zaznati 7. dan in 14. dan po transfekcija.
In vitro validacija izražanja eGFP circRNA
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
