Pomen testa moči mRNA
S hitrim razvojem cepiv in terapevtikov mRNA je potrebna posebna skupina analiznih metod za testiranje moči (opredelitev njihove biološke aktivnosti), ki vključuje translacijsko učinkovitost mRNA. Te metode običajno temeljijo na transfekciji celic in funkcionalnih testih ciljnega proteina.
Yaohai Bio-Pharma ponuja celične teste moči za mRNA zdravilne učinkovine ali izdelke LNP, vključno s celično transfekcijo (celice 293T, HepG2, HeLa, K562, U937, Raw264.7 itd.) in teste ELISA ali Western Blotting (WB).
Regulativne zahteve za teste moči
V skladu z regulativnimi premisleki Svetovne zdravstvene organizacije je treba "moč vsake serije končnega cepiva določiti z uporabo ustrezne kvantitativne in validirane funkcionalne metode". Potencialni testi moči in vitro lahko vključujejo transfekcijske sisteme na osnovi celic ali teste brez celic.« In USP je priporočil "celični test" za testiranje moči mRNA, tj. ekspresije ciljnega proteina.
Postopek
Korak 1. Transfekcija na osnovi celic z mRNA ali mRNA-LNP
Celice gojimo in transfektiramo z mRNA ali mRNA-LNP. Podrobneje se mRNA transfektira po mešanju s transfekcijskim reagentom, medtem ko se mRNA-LNP transfektira neposredno v celice. Po 24-48 urah s centrifugiranjem očistite supernatant, ki vsebuje izražen protein.
Korak 2. Funkcionalni testi ciljnega proteina
Izvedite teste ELISA ali WB, da ocenite funkcionalno vezavo ciljnih proteinov.
Študija primera
Testi moči vzorcev mRNA na osnovi celic
Yaohai-BioPharma je razvila celično metodo testiranja moči za mRNA, ki vključuje celično kulturo, transfekcijo celic in funkcionalne teste beljakovin. Transfektirali smo mRNA eGFP, mRNA mCherry, mRNA luciferaze, mRNA spike proteina v celice 293T in odkrili ciljni protein s fluorescenco, luminiscentnim ali barvnim signalom, WB, ELISA.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
