5'-končna zaklepanje je bistvena sprememba mRNA. mRNA z zaklepni strukture, posebej Cap1 strukture, omogočajo mRNA izogibati si vgrajene imunskih odzivov v živih organizmah, kar pomeni učinkovito prevajanje proteina.
Enzimatsko zaklepanje (dvokorak method) je tradicionalna metoda zaklepanja mRNA, podobna procesu zaklepanja v eukariotskih organizmih. Pod delovanjem vrste enzimov se 7-metilguanin (m7G) poveže na 5'-koncu mRNA prek trifosfatne vezi 5'-5' in podlega metilaciji, ki oblikuje zaklepno strukturo Cap 1 (m7GpppN).
Diagram oblike naravne zaklepne strukture
Tok enzimatske zaklepne reakcije je naslednji:
Linearni plazmidni DNA se uporablja kot predloga za transkripcijo in vitro (IVT) v prisotnosti T7 polimeraze, in mRNA z 5' end-cap strukturo se oblikuje po enokorakem očiščanju s pomočjo vakcinije capping enzyme in 2'-O-metiltransferaze.
Podrobnosti storitev
Izbirne storitve |
Podrobnosti storitev |
Dobavni rok (dan) |
enzimatsko zakrivanje mRNA |
Enzimski capping reakcija |
1 |
Optimizacija capping reakcije - izbirno |
Načrtovanje in optimizacija sestavnih delov reakcije |
3~7 |
Naše značilnosti
- Dizajn in optimizacija komponent capping reakcije
Komponenta capping reakcije je bila optimizirana, kar je znatno povečalo proizvodnjo mRNA transkripta.
- Verifikacija izražanja in vitro
Capped mRNA se transficira v 293T celice, in je mogoče zaznati izraz ciljnega proteina.
S strogo kontrolijo RNase v eksperimentalnem okolju in potrošniških materialih se učinkovito prepreči degradacija mRNA.
Studija primerov
Platforma mRNA od Yaohai Bio-Pharma je razvila popoln proces zakrivanja.
Za eGFP mRNA, predproizvod mRNA pripravljen s enzymatskim zakrivanjem, se lahko 24 ure po transfekciji celic 293T opazi intenziven eGFP fluorescenčni signal (zeleno fluorescenca), ki ga zaznamemo s pomočjo Western Blot (WB), kar dokazuje, da se ciljni protein, izboljšana zelena fluorescenca (eGFP), učinkovito izraža v vitro.
Izraz enzymatsko zakrite eGFP mRNA v celici 293T
SL
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
