V primerjavi z dvostopenjskim enzimskim zaključkom lahko enočasovna metoda skupne transkripcije z zaključkom znatno poenostavi proces. Ta metodo je usmerjeno v rezultate in vsebuje dodajanje zaključkovih analogov v reakcijo za vitro transkripcijo (IVT). Zaključkov analozi se lahko vpeljejo na začetku transkripcije, pri čemer se po koncu transkripcije dobi mRNA s zaključno strukturo. Trenutni tretji generacije zaključkovih analogov lahko izogibajo obratnemu zaključku in neposredno dodajo Cap 1 strukturo transkripcijskemu izdelku.
Zaradi vprašanj imunogenosti mRNA v vivo in učinkovitosti prevoda je proces IVT pogosto uporabljen z določenimi vrstami spremenjenih NTP-jev, med najpogostejšimi pa so spremenjeni nukleotidi psiudouridin (Ψ), N1-metil-psiudouridin (N1Ψ) in 5-metilcitozin (5mC).
Slika: Diagram korekcijskega in zaključnega reakcije mRNA
Podrobnosti storitev
Storitev |
Podrobnosti storitev |
Doba dostave (delovni dan) |
Korekcijsko zaključevanje |
Vzoren predpis v testu (Clean Cap analog) |
1-2 |
| Spremenjene nukleotide (Ψ/N1Ψ/5mC) |
| Odstranitev DNS predloge (DNase I) |
Optimizacija pogojev IVT - izbirno |
Načrtovanje in optimizacija sestavnih delov reakcije |
3-7 |
Naše značilnosti
- Raznovrstne strategije modifikacije nukleotidov
Večkratne izbire strategij modifikacije nukleotidov lahko izboljšajo izraz proteina.
- Optimiziran reakcijski sistem
Dosežite visoko transkripcijo in učinkovito zakrivanje.
- Stabilen proces zakrivanja
Dosežite stopnjo zakrivanja več kot 95%.
Učinkovito preprečite degradacijo mRNA z strogo kontrolirano RNazo v poskusnem okolju in potrošnjinah.
Studija primerov
Yaohai Bio-Pharma je razvil zrelo platformo za skupno transkripcijsko zakrivanje, pri kateri se uporabljajo čistih podobnikov zakritve za neposredno dodajanje Cap1 strukture, hkrati pa se izogibamo obratnemu zakrivanju. Po standardiziranem predobdelovanju vzorcev in detekciji s kapilarno elektroforezo (CE) lahko doseže stopnjo zakrivanja povečane zelene fluorescenčne proteine (eGFP) mRNA več kot 95%.
učinkovitost zakrivanja eGFP mRNA več kot 95%
EGFP mRNA in mCherry mRNA, pripravljena s kofranskripcionalnim zakržanjem, sta transficirana v celice 293T, oz. po 48h se opazuje močan fluorescenčni signal, kar pomeni, da je mRNA učinkovito izražena v celicah 293T.
Izraz eGFP mRNA in mCherry mRNA v celicah 293T
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
