V primerjavi z dvostopenjskim encimskim omejevanjem lahko enostopenjska metoda kotranskripcijskega omejevanja znatno zmanjša tok procesa. Metoda je usmerjena v rezultate in vključuje dodajanje analogov cap k reakciji transkripcije in vitro (IVT). Cap analoge lahko uvedemo na začetku transkripcije, mRNA s cap strukturo pa lahko dobimo po zaključku transkripcije. Trenutni analogi pokrovčkov tretje generacije se lahko izognejo obratnemu omejevanju in neposredno dodajo strukturo Cap 1 izdelku za prepis.
Za premisleke o imunogenosti in učinkovitosti prevajanja mRNA in vivo postopek IVT pogosto sprejme določene vrste modificiranih NTP, običajni modificirani nukleotidi pa so psevdouridin (Ψ), N1-metil-psevdouri-din (N1Ψ) in 5-metilcitozin (5mC) .
Slika: Diagram ko-transkripcije in reakcije omejevanja mRNA
Podrobnosti o storitvi
Storitev |
Podrobnosti o storitvi |
Dobavni rok (delovnik) |
Kotranskripcijska omejitev |
In vitro transkripcijski odziv (Clean Cap analog) |
1-2 |
| Nukleotidne modifikacije (Ψ/N1Ψ/5mC) |
| Odstranitev predloge DNA (DNase I) |
Optimizacija stanja IVT - neobvezno |
Oblikovanje in optimizacija reakcijskih komponent |
3-7 |
Naše lastnosti
- Raznolike strategije spreminjanja nukleotidov
Številne neobvezne strategije modifikacije nukleotidov lahko izboljšajo izražanje beljakovin.
- Optimiziran reakcijski sistem
Dosezite visoko transkripcijsko razmerje in visoko učinkovitost omejevanja.
- Stabilen postopek zapiranja
Doseči stopnjo omejitve več kot 95 %.
Učinkovito preprečite razgradnjo mRNA s strogim nadzorom RNaze v eksperimentalnem okolju in potrošnem materialu.
Študija primera
Yaohai Bio-Pharma je zgradil zrelo platformo za postopek ko-transkripcijskega omejevanja, pri čemer uporablja čiste analoge cap za neposredno dodajanje strukture Cap1, pri čemer se izogiba povratnemu omejevanju. Po standardizirani predobdelavi vzorca in detekciji s kapilarno elektroforezo (CE) lahko stopnja omejevanja mRNA izboljšane zelene fluorescentne beljakovine (eGFP) doseže več kot 95 %.
Učinkovitost omejevanja eGFP mRNA več kot 95 %
eGFP mRNA in mCherry mRNA, pripravljeni s kotranskripcijskim zapiranjem, se transfektirata v celice 293T in po 48 urah opazimo močan fluorescenčni signal, kar kaže, da je mRNA učinkovito izražena v celicah 293T.
Izražanje mRNA eGFP in mRNA mCherry v celici 293T
SL
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
