Osnova encapsulacije je načrtovanje in razvoj sistema dostave. Dobro načrtovani sistem dostave omogoča, da se molekule circRNA vnesete v teleso brez degradeacije s strani RNA enzimov in jih nato učinkovito dostavi na ciljno mesto, kjer prekrižijo celično membrano in se intracelularno sprostijo.
Lipidne nanoparticule (LNPs) so najboljši dostopni sistem, ki je na voljo, z prednostmi v inkapsulaciji, izrazu v vivo in varnosti v vivo v primerjavi s drugimi dostopnimi sistemi. LNPs z fragmenti nukleinske kisline se lahko enostavno zavzamejo v celice in oblikujejo intracelularne telesa. Ko vstopijo v celico, kisla okolja intracelularnega telesa protonirajo in pozitivno nabijajo glavo ioniziranega lипida, tako da se zliti z notranjo membrano intracelularnega telesa in sprosti ciljno nukleinsko kisloto v celico za dejanje.
Storitev circRNA Yaohai Bio-Pharma se vedno izboljšuje in lahko ponudi storitev inkapsulacije circRNA-LNP za optimizacijo pripadajočih kritičnih procesnih parametrov ter izboljšanje usklajenosti in ponovljivosti proizvodnje zdravil circRNA.
Proces | Podrobnosti storitev | Dobavni rok (dan) | Rezultati |
zaklepanje circRNA-LNP | Predobdelava snovi in tekočine | 2 | končni izdelek zdravila circRNA-LNP (DP) |
Mešanje s mikrofluidičnim napravljem | |||
Tangencialno točkovno filtriranje | 1 | ||
Sterilizacijska filtracija | |||
kvalitativni nadzor circRNA-LNP | Učinkovitost inkapsulacije | 1 | Izpitni poročil |
Velikost delcev in indeks polirazsežnosti | |||
Zeta potencial |
Hitra sinteza, visoka učinkovitost R&D ter predoptimizirane rešitve;
Odnos inkapsulacije lahko doseže več kot 90%;
Velikost lipidnih nanoclivok se da nadzirati s spremembo hitrosti in razmerja vstreljanja tekočine;
produkti circRNA-LNP so potrdili z izražanjem v celicah in vitro, ki učinkovito izražajo ciljno beljakvino.
Pripravljene so vzorce LNP-eGFP circRNA in njihove različne dose (1ug, 2ug in 4ug) direktno transfiramo v celice 293T, da se preveri, ali lahko izražajo ciljno beljakvino. Po 48 urah transfiriranja je mogoče opaziti jasen fluorescenčni signal, pri čemer je prisoten dose-odvisni učinek intenzitete fluorescenca.
Lipo-circ_eGFP, sestavljen iz liposomov in nezaključene eGFP circRNA, je uporabljen kot kontrola.