Pri pripravi serij RNA prekurzorjev je pogosto uporabljena metoda transkripcija v vitro (IVT). IVT reakcija uporablja linearni plazmidni DNA, ki vsebuje T7 promotor kot predložek, in sintetizira RNA prekurzor z nukleozidnimi trifosfatniki (NTP) kot substratom v prisotnosti T7 RNA polimeraze.
Metode in vitro ciklizacije vključujejo kemično ligacijo, enzimsko ligacijo in metodo permutirane intronske-eksonske (PIE) strukture. Kemična ligacija in enzimska ligacija sta primereni za ciklizacijo krajših RNA-jev. Ko je odlomek daljši od 100 nt, se hitrost ciklizacije značilno zmanjša. V nasprotnem primeru lahko metoda bazirana na sistemu PIE doseže ciklizacijo zaporedij dolgih 8 kb.
Pod katalizo guanozinske trifosfatne (GTP) se PIE struktura ciklizira v ekstrainsone skupine. Skupaj s strategijo, ki poveča hitrost ciklizacije, lahko Yaohai Bio-Pharma doseže ciklizacijo zaporedij dolgih do 4 kb, pri čemer je učinkovitost ciklizacije večja od 80%.
Ciklizacijska reakcija RNA v procesu poteka takole:
Predhodnik RNA se sintetizira s pomočjo transkripcije v vitro, pri čemer se komponenta PIE pod katalzo GTP samospaja in oblikuje circRNA.
Podrobnosti storitev
| Proces |
Podrobnosti storitev |
Doba dostave (delovni dan) |
| Transkripcija in cikliranje v laboratoriju |
Potrditev reakcijskega sistema |
1-2 |
| Reakcije transkripcije v testni cevici in ciklizacije |
| Degradacija z RNase R |
| Optimizacija reakcije |
Sestav reakcije, optimizacija časa |
2-5 |
Naše značilnosti
- Stroga izhodiščna razlika in optimizacija testa
Dosega se ciklizacija RNA do 4 kb.
- Visoka učinkovitost ciklizacije
Skupaj s pametno strategijo optimizacije zaporedja je mogoče doseči stopnjo ciklizacije več kot 80%.
Z strogo kontrolo RNasov v poskusni okolju in potrošnini učinkovito preprečujemo degradacijo RNA.
Studija primerov
Ciklizacija in obogatitev circRNA v vitro
Na podlagi sistema PIE je Yaohai Bio-Pharma optimizirala zaporedje circRNA, pri čemer je stopnja ciklizacije presegala 80% glede na agarsko gel elektroforezo (AGE). Z uporabo RNase R za obogatitev circRNA kažejo rezultati E-gel elektroforeze, da se linearni RNA predhodnik razgrne, in po nadaljnji očiščitvi se lahko odstrani večina cikličnega circRNA z pomanjkljivostmi. Rezinsko rešitev je razvila samodevna Yaohai Bio-Pharma.
Ciklizacija in obogatitev circRNA v vitro
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
