Prilagojeno sinteza saRNA
Samopovečujoča mRNA (saRNA), tudi znana kot replikonska RNA, kodira zapise in vitro transkripcije (IVT) mRNA in gen virske replicaze, izpeljane iz alfavirsov ali flavivirsov. Geni virske replicaze omogočajo samopovečevanje mRNA, kar pomeni povečano izrazitev proteina in minimalno zahtevano količino RNA v primerjavi z ne-povečevalno mRNA. Drug aspekt je, da je saRNA relativno velika molekula (več kot 14 kb).
Yaohai Bio-Pharma je uvedela skupino tehnologij za sintezo mRNA, ki omogočajo zagotavljanje ne-povečevalne mRNA in samopovečujoče mRNA (1000 nt~14000 nt), kot so na primer načrtovanje in optimizacija zaporedja, IVT, očiščenje, liofilizacija in oklepanje v lipidne nanocvice (LNP). Vsi izdelki so izpusteni pod strogi standardi nadzora kakovosti.
Slika 1. Strukturne značilnosti IVT mRNA: konvencionalna, krožna in samouveljavljiva mRNA.
Sekvenčne značilnosti samouveljavljive mRNA
Samouveljavljivo RNA vsebuje štiri nestrukturalske proteine (oznake kot nsP1, nsP2, nsP3 in nsP4), ki izhajajo iz alfavirusov, venezuelskega enegejskega encfalitisnega virusa (VEEV). Med temi ima nsP1 dvojno enzimsko aktivnost, imenovano GTaza in N7MTaza, medtem ko nsP2 zna RTPazo, kar je ključno za zakrpanje IVT mRNA za ustvarjanje Cap 0 strukture. Poleg tega služi nsP2 tudi kot proteaza in helikaza, s čimer omogoča zapleteno obdelovanje celotnega kompleksa nsP. Natančna funkcija nsP3 ostaja neznana, vendar vpleta interakcije z različnimi gostinjskimi celičnimi proteinami, s katerimi prispeva k umiku protivirusne odzivnosti gostitelja.
Podgenomska promotorja (SGP) alfavirusa se nahaja pred zanimivim genom (GOI). SGP element omogoča zagon transkripcije GOI, s tem da obiđe branje zaporedja, ki kodira virusne nsP proteine.
Slika 2. Synteziranje in celinske teste eGFP saRNA Yaohai Bio-Pharma RNASci platforme.
Prilagojene rešitve saRNA
Protokol za syntezo saRNA je podoben mRNA: Prilagojena sinteza mRNA
- Dizajn zaporedja
- Priprava plazmidnega vzorca
- transkripcija v testu (IVT)
- enzimatsko zakrivanje mRNA
- kotranskripcijsko zakrivanje mRNA
- čiščenje mRNA
- liofilizacija mRNA
- Zapoljevanje v LNP
- Analiza in testiranje
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
