Yaohai Bio-Pharma pripravlja circRNA na podlagi sistema PIE (poravnava eksonov in intronov), ki temelji na samospajalni funkciji tipa I intronov za dosego ciklizacije RNA. Struktura PIE je dizajnirana z uporabo gene T4 td ali predhodnika ribonukleinske kisline ribe, in vrstni red je naslednji:
RNA intron in podpirajoči eksonski odlomek sta razdeljeni na dva dela (5' končnik in 3' končnik), kjer je zaporedje 5' končnika preneseno na rep ciljnega zaporedja, zaporedje 3' končnika pa vstavljeno pred ciljno zaporedje, med njima pa vstavimo zaporedje ciljne gene.
Pod katalizo GTP pripelje struktura PIE do ciklizacije zaporedij, ki niso introni. Z kombiniranimu razumenemu pospešitvenemu načrtu hitrosti ciklizacije lahko doseže Yaohai Bio-Pharma ciklizacijo zaporedij do 4 kb z hitrostjo ciklizacije večjo od 80%.
Slika 1. Vitrinska cirkulacija circRNA na podlagi sistema PIE
Podrobnosti storitev
| Proces |
Izbirne storitve |
Podrobnosti storitev |
Doba dostave (delovni dan) |
| dizajn in optimizacija zaporedja circRNA |
Načrtovanje in optimizacija kodirnih zaporedij |
Poravnava CDS sekvence
Optimizacija kodonske CDS sekvence
|
1 |
| Dizajn in optimizacija nekodirujočih zaporedij |
Dizajn in optimizacija zaporedij intronov in eksonov
Dizajn in optimizacija homologe sekunde ramov
Dizajn in optimizacija spacerske sekunde
|
1-2 |
Splošne strategije za načrtovanje zaporedja mRNA
| Komponente CircRNA |
Biološke funkcije |
Strategije optimizacije |
| Sekvence dveh terminalnih intronov in eksonov |
GTP-katalizirano samoodtrgovanje introna za ciklizacijo sekvenc izven introna. |
Dizajnirano glede na gen T4 td ali predgen ribočlove fish oil tRNA. |
| Kodiranje |
IRES |
Notranji ribosomski prepoznavni lokacija, ki ureja prevajanje circRNA. |
Testiranje zaporedij notranjega ribosomskega vstopnega lokacije (IRES) iz različnih virusnih virov, npr. EMCV, CVB3 viri. |
| CDS |
Oblasti kodiranja za proteine, zaporedja kodirajo antigena, antitela ali druge funkcionalne proteine. |
Optimizacija kodonov poveča stopnjo prevajanja; določeni neoptimalni kodoni lahko igrajo vlogo v zlaganju proteina. |
| Ne-kodiranje |
Ne-kodirajoča zaporedja |
Ciljanje miRNK ali proteini za uveljavljanje regulacije genov ali proteinov. |
Ciljanje določenih vezavnih lokacij za miRNK ali proteine lahko ponavlja zaporedja vezavnega lokacije. |
Naše značilnosti
- Optimiziran sistem kombinacije PIE ciklizacije s razumno optimizacijskimi strategijami, da se doseže stopnja ciklizacije več kot 80%;
- Sodelovanje z vodilno ekipo za optimizacijo CDS in strokovno ekipo za umetne algoritme AI za dokončanje optimizacije kodonskega CDS območja;
- Zrelo in popolno procesno circRNA lahko dosežemo z visoko učinkovito ciklizacijo, visoko stabilnostjo in visoko učinkovitostjo prevoda.
Studija primerov
Yaohai Bio-Pharma je izdala kontrolni produkt povečan zeleno fluorescenčni beljak (eGFP) circRNA, ki temelji na sistemu PIE za dosego ciklizacije RNA.
Z uporabo običajnega transfekcione reagensa se eGFP circRNA transficira v 293T celice, in po 24h je mogoče zaznati eGFP (zelena) fluorescenčni signal, ki se pospeši po 48h. Fluorescenčni signal je še vedno mogoče zaznati sedmem in četrtem danu po transfekciji.
Dokazovanje izražanja eGFP circRNA v vitro
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
