L'analisi del sito di N-glicosilazione è fondamentale per comprendere le funzioni dei glicani. Yaohai Bio-Pharma utilizza la cromatografia liquida-spettrometria di massa (LC-MS) dopo la scissione enzimatica per il sito di N-glicosilazione.
Siamo stati coinvolti nella caratterizzazione strutturale proteica di varie molecole di grandi dimensioni, inclusi vaccini con subunità ricombinanti, nanocorpi/VHH/anticorpi a dominio singolo (sdAb), frammenti di anticorpi, ormoni/peptidi, citochine, fattori di crescita (GF), enzimi, collageni, eccetera.
Requisiti normativi per il sito di N-glicosilazione
Secondo la linea guida ICH Q6B, “per le glicoproteine, viene determinato il contenuto di carboidrati (zuccheri neutri, aminozuccheri e acidi sialici). Inoltre, la struttura delle catene di carboidrati, il modello oligosaccaridico (profilo antennario) e il/i sito/i di glicosilazione della catena polipeptidica vengono analizzati nel miglior modo possibile.
Metodo analitico
| Analisi |
Metodi |
| Sito di N-glicosilazione |
Cromatografia liquida-spettrometria di massa (LC-MS) dopo scissione enzimatica |
Procedure
1. Digestione enzimatica della proteina utilizzando trypsin o altre proteasi
2. Separare i glicopeptidi dei frammenti
3. Confermare il sito di N-glicosilazione mediante LC-MS
4. Analizzare i dati
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