La deammidazione delle catene laterali della glutammina e dell'asparagina è una modifica comune in termini di impatto sulle proprietà dei biofarmaci proteici. La deammidazione può verificarsi nei residui di glutammina, ma solitamente a un tasso molto più basso. I tassi di deammidazione sono influenzati dalla temperatura, dal pH, dalla struttura proteica locale e dai residui amminoacilici fiancheggianti.
Yaohai BioPharma offre un servizio di test di deamidazione degli aminoacidi, che consente di rilevare la deamidazione degli aminoacidi mediante cromatografia liquida-spettrometria di massa (LC-MS).
Siamo stati coinvolti nella caratterizzazione strutturale proteica di varie molecole di grandi dimensioni, inclusi vaccini con subunità ricombinanti, nanocorpi/VHH/anticorpi a dominio singolo (sdAb), frammenti di anticorpi, ormoni/peptidi, citochine, fattori di crescita (CF), enzimi, collageni, eccetera.
Requisiti normativi per la deammidazione degli amminoacidi
Secondo le linee guida ICH Q6B, le forme deamidate possono essere rilevate e caratterizzate mediante cromatografia, elettroforesi e/o altri metodi analitici pertinenti.
Metodi analitici
| Analisi |
Metodi |
| Deamidazione |
Cromatografia liquida-spettrometria di massa (LC-MS) |
Procedure
ad esempio, deammidazione aspartica
1. Digestione enzimatica
2. LC-MS in condizioni di cromatografia liquida ad alte prestazioni (HPLC).
3. Analisi dei dati
La deammidazione dell'asparagina avviene tramite un intermedio succinimmide (Suc), che è suscettibile alla racemizzazione e all'idrolisi, producendo quattro isomeri Asp, inclusi L-Asp, L-IsoAsp, D-Asp e D-IsoAsp.
In teoria, la deamidazione del Gln potrebbe generare quattro isomeri Glu corrispondenti attraverso un processo simile alla deamidazione dell'Asn.
La spettrometria di massa ad alta risoluzione identifica facilmente la differenza di massa di 1-Da tra i peptidi contenenti Asn/Gln e le loro corrispondenti controparti deamidate Asp/Glu.
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