Il profiling dei N-glicani è fondamentale per la produzione di bi farmaci. Yaohai Bio-Pharma fornisce il servizio di profiling dei N-glicani utilizzando la Cromatografia Liquida-Spettrometria di Massa (LC-MS) sui glicani rilasciati e contrassegnati. I passaggi generali per la preparazione del campione di N-glicani includono la digestione della glicoproteina (GP), la de-glicosilazione, la purificazione, l'etichettatura/derivatizzazione e l'Estrazione a Fase Solida (SPE).
Siamo stati coinvolti nella Caratterizzazione Strutturale delle Proteine di vari grandi molecole, tra cui Vaccini Ricombinanti a Sottounita', Nanocorpi/VHHs/Corpi Antigenici Singolo-dominio (sdAbs), Frammenti di Antibodi, Ormoni/Peptidi, Cytokine, Fattori di Crescita (GF), Enzimi, Collagene, ecc.
Requisiti Regolatori per il Profiling di N-Glicani
Secondo la guida ICH Q6B, "per i glicoproteine, si determina il contenuto di carboidrati (zuccheri neutri, zuccheri amminici e acidi siarici). Inoltre, la struttura delle catene di carboidrati, il pattern degli oligosaccaridi (profilo antennario) e i siti di glicosilazione della catena polipeptidica vengono analizzati nella misura del possibile."
Metodo Analitico
| Analisi |
Metodi |
| Profilatura N-glicana |
Analisi LC-MS dei glicani rilasciati e marcati |
Procedure
1. Rilascio glicanico enzimatico con Peptide N-Glycosidase F (PNGase F)
2. Derivatizzazione dei glicani rilasciati con 2-aminobenzamide (2-AB)
3. Purificazione dei N-glicani raccolti su una colonna TSK Amide - 80 se sono presenti grandi quantità di detergenti, sali non volatili o materiali con gruppi ammino liberi
4. Marcatura con 2-aminobenzamide (2-AB) fluorescente
5. Analisi LC-MS dei N-glicani marcati
- Sei. Analisi dei dati
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