L'Importanza dello Sviluppo del Processo Downstream (DSP)
Il brodo di fermentazione completo contiene la proteina obiettivo o il plasmide, nonché impurità correlate al prodotto e al processo, ad esempio aggregati, substrati cellulari microbici, Proteine delle Cellule Ospiti (HCP), DNA delle Cellule Ospiti (HCD), endotossina e antibiotici.
Pertanto, è fondamentale progettare un DSP efficiente, processo di purificazione, per rimuovere determinate impurità e produrre una sostanza farmaceutica altamente purificata e di alta qualità. Inoltre, l'ottimizzazione del processo di purificazione può aiutare a incrementare il recupero del prodotto, ridurre i costi e migliorare la scalabilità e la riproducibilità del processo.
Parole chiave: sviluppo del processo, ottimizzazione e validazione, processo di purificazione, cromatografia, eliminazione delle impurità, rimozione HCP, eliminazione HCD, rimozione dell'endotossina, denaturazione e rifolding della proteina, assemblaggio VLP, congiunzione
Applicazione: industria biofarmaceutica, medicina umana, medicina veterinaria, vaccini, biologici ricombinanti a grande molecola, biologici ricombinanti, reagenti biologici
Soluzioni DSP di Yaohai Bio-Pharma
Abbiamo un'ampia esperienza nella separazione di proteine o plasmidi di interesse da matrici complesse sviluppando e ottimizzando il processo di purificazione downstream. Esistono diversi tipi di operazioni unitarie adatte alla purificazione di biologici, tra cui centrifugazione, filtri, omogenizzazione, lisi alcalina, ultrafiltrazione, precipitazione, denaturazione e rifolding di proteine, cromatografia, ecc.
I nostri servizi disponibili per lo sviluppo della purificazione includono:
- Sviluppo del processo completo di purificazione dalla raccolta delle cellule o del sobbattente fino all'ingrediente attivo finale.
- Ottimizzazione del processo di purificazione in base alle impurità correlate al prodotto e al processo per migliorare la qualità e la sicurezza del prodotto, ad esempio HCP, HCD, endotossina.
- Definizione e ottimizzazione dei parametri chiave in una o più operazioni unitarie, incluso il lisato cellulare, la filtrazione a flusso tangenziale, lo screening della resina, la cromatografia, la denaturazione e rifolding delle proteine, ecc.
- Ottimizzazione del processo in termini di qualità, resa, recupero, costo e scalabilità.
- Validazione del processo di purificazione downstream.
- Valutazione basata sul rischio dell'intervallo dei parametri e progettazione degli esperimenti (DoE) nella modellazione del processo.
Dettagli del servizio
Piattaforme standardizzate di purificazione di proteine o plasmidi si basano su più passaggi di purificazione grezza e meno di 4 passaggi di cromatografia, inclusi cattura, purificazione intermedia e finitura.
| Dettagli del servizio |
Operazioni Unitarie |
Parametri |
| Purificazione Grezza |
Centrifugazione |
Velocità rotazionale, Tempo |
| Omogenizzazione ad alta pressione |
Contenuto Solido Totale, Pressione, Cicli |
| Lisi Alcalina Continua |
Il rapporto tra Cellule Risospese e Soluzione di Lisi, Tempo di Lisi |
| Filtrazione a Flusso Tangenziale |
Materiale della Membrana e Dimensione dei Pori, Velocità di Flusso del Fluido da Trattare Pressione Trasmembrana (TMP), Rapporto tra Volume di Filtrato e Area della Membrana |
| Precipitazione |
Tipo e Concentrazione di Precipitante, Additivo, pH, Temperatura, Tempo |
| Denaturazione e Rifolding |
Solubilizzazione delle Proteine degli Inclusion Bodies |
Concentrazione di Denaturante (ad es., Urea, Cloruro di Guanidina, Detergente Ionico Forte), Detergenti (ad es., Solfochinurenio di Sodio, SDS), Agenti Riducenti (ad es., Ditiotreitol, DTT), Agenti Chelanti (Acido Etilenediaminetetraacetico, EDTA), Temperatura, Tempo |
| Ripiegamento delle proteine |
Metodi di ripiegamento (diluizione, dialisi o ripiegamento con SEC), Concentrazioni di proteine, Buffer, pH, Temperatura, Tempo, Agenti ossidanti e riducenti (ad esempio, Glutathione, GSH / Glutathione ossidato, GSSH, DTT/GSSH, Cisteina/Cistina), Additivi a piccola molecola (L-arginina, Ure, Guanidina/HCl e Detergenti) |
| Cattura, Purificazione Intermedia e Lucidatura |
AC (Cromatografia Affinità) |
Diversi tipi di resina/colonna cromatografica (ad esempio, AC, IEX, HIC, SEC, RPC, MMC), Lunghezza e Diametro della Colonna, Composizione del Buffer, Volume di Iniezione, Composizione della Fase Mobile (Assorbimento e Dessorbimento), pH, Velocità di Flusso, Condizioni di Legame, Lavaggio ed Eluibile. |
| IEX (Cromatografia di Scambio Anionico o Cat ionico) |
| HIC (Cromatografia con Interazione Idrofobica) |
| Desalificazione e/o cromatografia di esclusione dimensionale (SEC) |
| RPC (Cromatografia a Fase Inversa) |
| MMC, Cromatografia a Modalità Mista |
Studio di caso
CASO 1
Siamo incaricati di sviluppare e ottimizzare il processo di purificazione downstream per aumentare la purezza della proteina dal 85% al 90% riducendo i passaggi di cromatografia.
Yaohai ha fornito un processo di purificazione robusto e scalabile con 3 passaggi di cromatografia per la proteina target, un'allergia batterica. E la purezza finale ha raggiunto il 95%.
CASO 2
Yaohai è stata incaricata dal nostro cliente di ottimizzare il processo di rimozione degli endotossine del vaccino a particelle simili a virus (VLP).
Il nostro team ha eseguito l'ottimizzazione dei parametri di cromatografia e ha preparato una sostanza farmaceutica con una purezza del 98% e residuo di endotossina di 12,8EU/mg.
Le nostre esperienze
- Siamo stati coinvolti nello sviluppo e nella produzione di vari molecole grandi, inclusi vaccini a sottounita ricombinanti, VLPs, ormoni (insulina, GLP-1, ormone della crescita), citochine (Interleuchina-2/IL-2, IL-15, IL-21), fattori di crescita (EGF, FGF, NGF), nanocorpi/anticorpi a dominio singolo (sdAbs), enzimi, ecc.
Apparecchiature
Utilizziamo i sistemi AKTA Pure, AKTA Avant e HPLC preparativi di prima classe nel settore per eseguire vari metodi di cromatografia, inclusa la cromatografia per affinità, per scambio ionico, per interazione idrofoba, a fase inversa e per esclusione dimensionale.
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