Le proteine ricombinanti spesso subiscono l'ossidazione dei gruppi laterali degli aminoacidi esposti, come il triptofano (Trp) e la metionina (Met), modificando le proprietà fisicochimiche delle proteine. Queste modifiche possono a loro volta contribuire a cambiare le funzioni biologiche delle proteine interessate, come la perdita di legame, la riduzione dell'attività enzimatica, una eliminazione inattesa e rapida. Le proteine sono obiettivi importanti per le reazioni ossidative poiché reagiscono rapidamente con gli ossidanti ed sono abbondanti nelle cellule, nei tessuti extracellulari e nei fluidi corporei.
Pertanto, monitorare l'ossidazione delle proteine è fondamentale per uno sviluppo biotecnologico efficace.
Yaohai Bio-Pharma offre un servizio di analisi dell'ossidazione degli aminoacidi, che consente di determinare l'ossidazione degli aminoacidi tramite Cromatografia Liquida-Spettrometria di Massa (LC-MS).
Siamo stati coinvolti nella Caratterizzazione Strutturale delle Proteine di vari grandi molecole, inclusi Vaccini a Sottounità Ricombinanti, Nanocorpi / VHHs / Antibodi a singolo dominio (sdAbs), Frammenti di Antibodi, Ormoni/Peptidi, Cytokine, Fattori di Crescita (GF), Enzimi, Collagene, ecc.
Requisiti Regolatori per l'Ossidazione degli Aminoacidi
Secondo le linee guida ICH Q6B, le forme ossidate possono essere rilevate e caratterizzate mediante metodi cromatografici, elettroforetici e/o altri metodi analitici pertinenti (ad esempio, Cromatografia Liquida ad Alte Prestazioni (HPLC), elettroforesi capillare, spettrometria di massa, dicromismo circolare).
Metodi Analitici
| Analisi |
Metodi |
| Ossidazione degli Aminoacidi |
LC-MS, Cromatografia Liquida ad Alte Prestazioni in Fase Inversa (RP-HPLC) o Cromatografia Liquida ad Alte Prestazioni con Interazione Idrofoba (HIC-HPLC) e spettrometria di massa |
Procedure Analitiche
1. Preparazione del campione
2. LC-MS
3. Analisi dei dati
I residui di Triptofano (Trp) sono particolarmente suscettibili all'ossidazione a causa della alta reattività dell'indolo aromatico con le specie reattive di ossigeno. L'ossidazione del Trp richiede una certa esposizione dei residui di Trp che normalmente sono sepolti nella struttura tridimensionale della proteina.
Tuttavia, quando i residui di Trp vengono ossidati, possono trasformarsi in una varietà di prodotti con proprietà molto diverse dal Trp originale. Il percorso più comune per l'ossidazione del Trp include la formazione di N-formilkynurenina (Differenza di massa: +32).
Un altro aminoacido comunemente ossidato è la metionina. L'atomo di zolfo nel residuo di Met può accettare un o due atomi di ossigeno, portando alla formazione di solfossido (Differenza di massa: +16) o solfone (Differenza di massa: +32), corrispondentemente. Questa modifica è relativamente comune a causa dell'esposizione superficiale tipicamente alta di Met.
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