Sintesis In Vitro mRNA
Komponen utama mRNA adalah 5'-cap, 5'-UTR, open reading frame (ORF), 5'-UTR, dan 5' poly A tail, yang penting untuk menjaga fungsi mRNA. Para peneliti telah menggunakan berbagai metode untuk mengidentifikasi dan mengoptimalkan urutan dan struktur mRNA.
Sintesis mRNA dilakukan berdasarkan transkrip in vitro (IVT) menggunakan templat DNA linier, RNA polimerase (T3, T7, atau SP6), nukleotida yang tidak dimodifikasi atau dimodifikasi, enzim, dan reagen yang sesuai.
Modifikasi Tutup 5'
Urutan mRNA matang dari eukariosit menunjukkan tutup 7-metilguanosin (m7G) di ujung 5', yang meningkatkan stabilitas mRNA dan efisiensi translasi. Ada dua metode umum untuk menangkap mRNA secara in vitro. Pertama, mRNA dapat dibatasi bersama dengan transkrip in vitro dengan menambahkan analog penutup struktur m7GpppG (misalnya CleanCap) ke sistem IVT. Metode pembatasan kotranskripsional ini memberikan struktur kapsul 5' alami dan meningkatkan efisiensi pembatasan hingga hampir 90-99%. Kedua, pemetaan mRNA juga dapat dilakukan dengan memetakan reaksi enzim setelah reaksi transkripsi in vitro.
Modifikasi PoliA
Ekor poli(A) juga memperpanjang waktu paruh mRNA in vivo dan meningkatkan efisiensi translasi mRNA. Panjang ekor poli(A) yang diperkuat harus 100-300 nukleotida. Selain itu, adenosin yang dimodifikasi meningkatkan stabilitas ekor poli A terhadap degradasi RNase seluler. Ekor Poli A dapat disisipkan melalui transkripsi in vitro menggunakan cetakan DNA yang mengkode poli A, sehingga menghasilkan panjang rangkaian poli A yang spesifik. Polimerase poli A rekombinan juga dapat digunakan melalui poliadenilasi enzimatik setelah transkripsi mRNA.
Modifikasi Nukleotida
Nukleosida yang dimodifikasi dapat menghambat pengenalan dan/atau aktivasi reseptor pengenalan pola (PRR) dan meningkatkan kemanjuran vaksin mRNA dalam dua cara yang sangat berbeda. penambahan nukleosida tertentu yang dimodifikasi secara kimia termasuk pseudouridine (ψ), 1-methylpseudouridine (m1ψ), thiouridine (s4U) dan 5-methylcytosine (m5C) dapat mencegah aktivasi TLR7/8 dan reseptor imun bawaan lainnya, yang secara signifikan mengurangi imunogenisitas. dari mRNA.
Sistem Pengiriman mRNA
Untuk mempertahankan fungsi mRNA, ia perlu memasuki sitoplasma inang dan mengekspresikan antigen spesifik. Salah satu tantangan tersulit yang dihadapi vaksin dan terapi mRNA terletak pada pengiriman mRNA ke dalam sel target dengan tingkat translasi yang cukup tinggi karena memerlukan sistem pengiriman mRNA yang sangat spesifik dan efisien. Beberapa vektor pengiriman mRNA telah dikembangkan dan digunakan, termasuk sel dendritik (DC), protamin, polimer kationik, dan liposom kationik.
Kompleks lipid kationik dengan mRNA dan sediaan lainnya secara kolektif dapat membentuk nanopartikel berukuran 80-200 nm yang disebut nanopartikel lipid (LNPs). Sebagai salah satu sistem pengiriman mRNA tercanggih, LNP mencakup lipid kationik yang dapat terionisasi, fosfolipid alami, kolesterol, dan polietilen glikol (PEG). Beberapa vaksin dan terapi RNA (siRNA dan mRNA) yang disetujui oleh Badan Pengawas Obat dan Makanan AS didasarkan pada sistem pengiriman LNP.
Yaohai Bio-Pharma Menawarkan Solusi Terpadu untuk RNA
|
Katalog Produk RNA
- Katalog Produk mRNA
- Katalog Produk saRNA
- Katalog Produk circRNA
|
Sintesis RNA Kustom
- Sintesis mRNA khusus
- Sintesis saRNA khusus
- Sintesis circRNA khusus
|
Layanan CDMO mRNA
- Pengembangan proses
- Manufaktur GMP
- Pengisian dan Selesai Aseptik
- Analisis dan Pengujian
|
Kiriman Khusus
|
Kelas
|
Deliverables
|
Spesifikasi
|
Aplikasi
|
|
non-GMP
|
Zat Obat, mRNA
|
0.1~10 mg (mRNA)
|
Penelitian praklinis seperti transfeksi sel, pengembangan metode analitik, studi pra-stabilitas, pengembangan formulasi
|
|
Produk Obat, LNP-mRNA
|
|
GMP, Sterilitas
|
Zat Obat, mRNA
|
10mg~70 gram
|
Obat baru investigasi (IND), Otorisasi uji klinis (CTA), Pasokan uji klinis, Permohonan lisensi biologis (BLA), Pasokan komersial
|
|
Produk Obat, LNP-mRNA
|
5000 botol atau jarum suntik/kartrid yang sudah diisi sebelumnya
|
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
TIDAK
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
