Sintesis mRNA in Vitro
Komponen utama mRNA adalah 5’-cap, 5’-UTR, open reading frame (ORF), 5’-UTR, dan ekor poli A 5’, yang semuanya penting untuk mempertahankan fungsi mRNA. Para peneliti telah menggunakan berbagai metode untuk mengidentifikasi dan mengoptimalkan urutan dan struktur mRNA.
Sintesis mRNA dilakukan berdasarkan transkrip in vitro (IVT) menggunakan templat DNA linear, polimerase RNA (T3, T7, atau SP6), nukleotida tak dimodifikasi atau dimodifikasi, enzim, dan reagen yang sesuai.
modifikasi 5’ Cap
Urutan mRNA matang dari eukariot menunjukkan kap 7-metilguanosin (m7G) di ujung 5', yang meningkatkan stabilitas mRNA dan efisiensi translasi. Ada dua metode umum untuk menangkap mRNA in vitro. Pertama, mRNA dapat diberi kap bersama dengan transkrip in vitro dengan menambahkan analog kap berstruktur m7GpppG (misalnya, CleanCap) ke sistem IVT. Metode penambahan kap selama transkripsi ini memberikan struktur kapsul 5' yang alami dan meningkatkan efisiensi penambahan kap hingga hampir 90-99%. Kedua, pemetaan mRNA juga dapat dilakukan melalui reaksi enzim pemetaan setelah reaksi transkripsi in vitro.
Modifikasi PolyA
Poly(A) tail juga memperpanjang waktu paruh mRNA secara in vivo dan meningkatkan efisiensi translasi mRNA. Panjang poly(A) tail yang diperbesar sebaiknya 100-300 nukleotida. Selain itu, adenosin yang dimodifikasi meningkatkan kestabilan poly A tail terhadap degradasi oleh RNase seluler. Poly A tail dapat disisipkan melalui transkripsi in vitro menggunakan templat DNA yang mengkodekan poly A, sehingga menghasilkan panjang urutan poly A tertentu. Polimerase poly A rekombinan juga dapat digunakan untuk poliadenilasi enzimatik setelah transkripsi mRNA.
Modifikasi Nukleotida
Nukleosida yang dimodifikasi dapat menghambat pengenalan dan/atau aktivasi reseptor pengenalan pola (PRR) dan meningkatkan efikasi vaksin mRNA dengan dua cara yang sepenuhnya berbeda. Penambahan nukleosida tertentu yang dimodifikasi secara kimia, termasuk pseudouridine (ψ), 1-metilpseudouridine (m1ψ), thiouridine (s4U), dan 5-metilcytosine (m5C), dapat mencegah aktivasi TLR7/8 dan reseptor kekebalan bawaan lainnya, yang secara signifikan mengurangi imunogenisitas mRNA.
sistem Pengiriman mRNA
Untuk mempertahankan fungsi mRNA, ia perlu memasuki sitoplasma inang dan mengekspresikan antigen spesifik. Salah satu tantangan paling sulit yang dihadapi oleh vaksin mRNA dan terapeutik adalah mengantarkan mRNA ke dalam sel target dengan tingkat translasi yang cukup tinggi, sehingga diperlukan sistem pengiriman mRNA yang sangat spesifik dan efisien. Beberapa vektor pengiriman mRNA telah dikembangkan dan digunakan, termasuk sel dendritik (DCs), protamin, polimer kationik, dan liposom kationik.
Kompleks dari lipid kationik dengan mRNA dan persiapan lainnya dapat bersama-sama membentuk nanopartikel berukuran 80-200 nm yang dikenal sebagai lipid nanoparticle (LNP). Sebagai salah satu sistem pengiriman mRNA yang paling canggih, LNP mencakup lipid kationik yang dapat ionisasi, fosfolipid alami, kolesterol, dan polietilen glikol (PEG). Beberapa vaksin RNA dan terapi (siRNA dan mRNA) yang disetujui oleh U.S. Food and Drug Administration didasarkan pada sistem pengiriman LNP.
Yaohai Bio-Pharma Menyediakan Solusi Satu Atap untuk RNA
Hasil Kustom
|
Grade
|
Hasil Pekerjaan
|
Spesifikasi
|
Aplikasi
|
|
non-GMP
|
Zat Obat, mRNA
|
0,1~10 mg (mRNA)
|
Penelitian praklinis seperti transfeksi sel, Pengembangan metode analitis, Studi pra-stabilitas, Pengembangan formulasi
|
|
Produk Obat, LNP-mRNA
|
|
GMP, Sterilitas
|
Zat Obat, mRNA
|
10 mg~70 g
|
Obat baru investigasional (IND), Ijin uji klinis (CTA), Pasokan uji klinis, Aplikasi lisensi biologis (BLA), Pasokan komersial
|
|
Produk Obat, LNP-mRNA
|
5000 vial atau suntikan prasetel/ kartrid
|
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
