Pentingnya Pengembangan Proses Hilir (DSP).
Seluruh kaldu fermentasi mengandung protein target atau plasmid, serta pengotor yang berhubungan dengan produk dan proses, misalnya agregat, substrat sel mikroba, Protein Sel Inang (HCP), DNA Sel Inang (HCD), endotoksin, dan antibiotik.
Oleh karena itu, sangat penting untuk merancang DSP yang efisien, proses pemurnian, untuk menghilangkan kotoran tertentu dan menghasilkan zat obat yang sangat murni dan berkualitas tinggi. Selain itu, optimalisasi proses pemurnian dapat membantu meningkatkan perolehan produk, mengurangi biaya, dan meningkatkan skalabilitas dan reproduktifitas proses.
Kata kunci: pengembangan proses, optimasi dan validasi, proses pemurnian, kromatografi, eliminasi pengotor, penghilangan HCP, eliminasi HCD, penghilangan endotoksin, denaturasi dan pelipatan ulang protein, perakitan VLP, konjugasi
Aplikasi: Industri biofarmasi, pengobatan manusia, pengobatan hewan, vaksin, biologi molekul besar rekombinan, biologi rekombinan, reagen biologis
Solusi DSP dari Yaohai Bio-Pharma
Kami memiliki pengalaman luas dalam mengisolasi protein target atau plasmid dari matriks kompleks dengan mengembangkan dan mengoptimalkan proses pemurnian hilir. Ada berbagai jenis operasi unit yang cocok untuk pemurnian biologi, termasuk sentrifugasi, filtrasi, homogenisasi, lisis basa, ultrafiltrasi, pengendapan, denaturasi dan pelipatan ulang protein, kromatografi, dll.
Layanan pengembangan pemurnian kami yang tersedia meliputi:
- Pengembangan seluruh proses pemurnian mulai dari pengumpulan sel atau supernatan hingga bahan aktif akhir.
- Optimalisasi proses pemurnian berdasarkan pengotor yang terkait dengan produk dan proses untuk meningkatkan kualitas dan keamanan produk, misalnya HCP, HCD, endotoksin.
- Definisi dan optimalisasi parameter utama dalam satu atau beberapa unit operasi, termasuk lisis sel, filtrasi aliran tangensial, penyaringan resin, kromatografi, denaturasi dan pelipatan ulang protein, dll.
- Optimalisasi proses dalam hal kualitas, hasil, pemulihan, biaya, dan skalabilitas.
- Validasi proses pemurnian hilir.
- Penilaian rentang parameter berbasis risiko dan Desain Eksperimen (DoE) dalam pemodelan proses.
Detail Layanan
Platform pemurnian protein atau plasmid terstandar didasarkan pada beberapa langkah pemurnian kasar dan kurang dari 4 langkah kromatografi, termasuk penangkapan, pemurnian antara, dan pemolesan.
| Detail Layanan |
Operasi Satuan |
Parameters |
| Pemurnian Kasar |
Sentrifugasi |
Kecepatan Rotasi, Waktu |
| Homogenisasi Tekanan Tinggi |
Total Konten Padat, Tekanan, Siklus |
| Lisis Alkali Berkelanjutan |
Rasio Sel yang Diresuspensi terhadap Larutan Lisis, Waktu Lisis |
| Filtrasi Aliran Tangensial |
Bahan Membran dan Ukuran Pori, Laju Aliran Umpan Tekanan Transmembran (TMP), Rasio volume filtrat terhadap luas membran |
| pengendapan |
Jenis Pengendapan dan Konsentrasi, Aditif, pH, Suhu, Waktu |
| Denaturasi dan Refolding |
Inklusi pelarutan protein tubuh |
Konsentrasi Denaturant (misal, Urea, Guanidine HCl, Deterjen Ionik Kuat), Deterjen (misal, Natrium dodesil sulfat, SDS), Zat Pereduksi (misal, Dithiothreitol, DTT), Zat Pengkelat (Ethylenediaminetetraacetic acid, EDTA), Suhu, Waktu |
| Pelipatan kembali protein |
Metode Pelipatan Ulang (pengenceran, dialisis atau pelipatan ulang SEC), Konsentrasi Protein, Buffer, pH, Suhu, Waktu, Agen Pengoksidasi dan Pereduksi (misalnya, Glutathione, GSH/ Glutathione Teroksidasi, GSSH, DTT/GSSH, Sistein/Sistin), Aditif Molekul Kecil (L-arginin, Urea, Guanidine/HCl, dan Deterjen) |
| Penangkapan, Pemurnian Menengah, dan Pemolesan |
AC (Kromatografi Afinitas) |
Beberapa jenis kromatografi resin/kolom (misal AC, IEX, HIC, SEC, RPC, MMC), Panjang dan Diameter Kolom, Komposisi Buffer, Volume Injeksi, Komposisi Fase Gerak (Adsorpsi dan Desorpsi), pH, Laju Aliran, Pengikatan, Kondisi Pencucian dan Elusi. |
| IEX (Kromatografi Pertukaran Anion atau Kation) |
| HIC (Kromatografi Interaksi Hidrofobik) |
| Kromatografi penghilangan garam dan/atau eksklusi ukuran (SEC) |
| RPC (Kromatografi Fase Terbalik) |
| MMC, Kromatografi mode campuran |
Studi kasus
Kasus 1
Kami ditugaskan untuk mengembangkan dan mengoptimalkan proses pemurnian hilir untuk meningkatkan kemurnian protein dari 85% menjadi 90% sekaligus mengurangi langkah kromatografi.
Yaohai memberikan proses pemurnian yang kuat dan terukur dengan 3 langkah kromatografi untuk protein target, alergi bakteri. Dan kemurnian akhir mencapai 95%.
Kasus 2
Yaohai ditunjuk oleh klien kami untuk mengoptimalkan proses pembuangan endotoksin dari vaksin partikel mirip virus (VLP).
Tim kami melakukan optimasi parameter kromatografi dan menyiapkan zat obat dengan kemurnian 98% dan residu endotoksin 12.8EU/mg.
Pengalaman kami
- Kami telah terlibat dalam pengembangan dan pembuatan berbagai molekul besar, termasuk vaksin subunit rekombinan, VLP, hormon (insulin, GLP-1, hormon pertumbuhan), sitokin (Interleukin-2/IL-2, IL-15, IL-21 ), faktor pertumbuhan (EGF, FGF, NGF), nanobodi/antibodi domain tunggal (sdAbs), enzim, dll.
Equipment
Kami menggunakan sistem HPLC AKTA Murni, AKTA Avant, dan Preparatif yang terdepan di industri untuk kinerja berbagai metode kromatografi termasuk kromatografi afinitas, pertukaran ion, interaksi hidrofobik, fase balik, dan eksklusi ukuran.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
TIDAK
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
