Hunian situs N-glikosilasi adalah ciri fisiologis glikoprotein dan terutama menghasilkan N-glikan. Layanan analisis hunian situs N-glikosilasi Yaohai Bio-Pharma dilakukan melalui pencernaan, pelepasan, pengayaan, dan analisis menggunakan Kromatografi Cair-Elektrospray Ionisasi Spektrometri Massa-Spektrometri Massa (LC-ESI-MS/MS).
Kami telah terlibat dalam Karakterisasi Struktural Protein dari berbagai molekul besar, termasuk Vaksin Subunit Rekombinan, Nanobodi/VHHs/ Antibodi Domain Tunggal (sdAbs), Fragmen Antibodi, Hormon/Peptida, Sitokin, Faktor Pertumbuhan (GF), Enzim, Kolagen, dll.
Persyaratan Peraturan untuk Hunian Situs N-glikosilasi
Menurut pedoman ICH Q6B, “untuk glikoprotein, kandungan karbohidrat (gula netral, gula amino, dan asam sialat) ditentukan. Selain itu, struktur rantai karbohidrat, pola oligosakarida (profil antena), dan lokasi glikosilasi rantai polipeptida dianalisis sebaik mungkin.”
Metode Analisis
| Analisis |
metode |
| Hunian situs N-glikosilasi |
LC-MS setelah pencernaan deglikosilase dan protease |
Prosedur
1. Protein mencerna protein untuk menghasilkan fragmen peptida kecil.
2. Pelepasan N-glikan menggunakan endoglikosidase H atau PNGase F. Endoglikosidase H memutus ikatan antara dua residu GlcNAc dalam inti glikan yang terhubung dengan N, sedangkan PNGase F adalah glikoamidase yang memutuskan ikatan antara GlcNAc dan Asn, sehingga membebaskan seluruh rantai gula dan mengubah Asn menjadi Asp dengan peningkatan massa 1-Da.
3. Pengayaan N-glikopeptida melalui HILIC (Kromatografi Cair Interaksi Hidrofilik)
4. Analisis hunian situs glikosilasi N-link menggunakan LC-ESI-MS/MS.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
TIDAK
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
