Kehadiran situs N-glikosilasi adalah fitur fisiologis dari glikoprotein dan secara utama menghasilkan N-glikan. Layanan analisis kehadiran situs N-glikosilasi dari Yaohai Bio-Pharma dilakukan melalui pencernaan, pelepasan, pengayaan, dan analisis menggunakan Kromatografi Likuid-Elektrospray Ionisasi Spektrometri Massa-Spektrometri Massa (LC-ESI-MS/MS).
Kami telah terlibat dalam Karakterisasi Struktur Protein dari berbagai molekul besar, termasuk Vaksin Subunit Rekombinan, Nanobodies/VHHs/ Antibodi Domain Tunggal (sdAbs), Fragmen Antibodi, Hormon/Peptida, Sitokin, Faktor Pertumbuhan (GF), Enzim, Kolagen, dll.
Persyaratan Regulasi untuk Kehadiran Situs N-glikosilasi
Menurut panduan ICH Q6B, “untuk glikoprotein, kandungan karbohidrat (gula netral, gula amino, dan asam sialat) ditentukan. Selain itu, struktur rantai karbohidrat, pola oligosakarida (profil antena), dan situs glukosilasi dari rantai polipeptida dianalisis sejauh mungkin.”
Metode Analitis
| Analisis |
Metode |
| Okupansi Situs N-glikosilasi |
LC-MS setelah pencernaan deglikosilase dan protease |
Prosedur
1. Pencernaan protein dari protein untuk menghasilkan fragmen peptida kecil.
2. Pelepasan N-glikan menggunakan endoglikosidase H atau PNGase F. Endoglikosidase H memutus ikatan antara dua residu GlcNAc di inti glikan N-tersambung, sedangkan PNGase F adalah glicoamidase yang memutus ikatan antara GlcNAc dan Asn, melepaskan seluruh rantai gula dan mengonversi Asn menjadi Asp dengan peningkatan massa 1-Da.
3. Pengayaan N-glikopeptida melalui HILIC (Kromatografi Cair Interaksi Hidrofilik)
4. Analisis okupansi situs glikosilasi N-tersambung menggunakan LC-ESI-MS/MS.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
