Signifikansi Pengembangan Proses Hulu
Proses hulu (USP), juga dikenal sebagai proses fermentasi, merupakan salah satu tahap awal dari bioproses hulu. Proses fermentasi mikroba sangat penting untuk budidaya sel dengan kepadatan tinggi dan ekspresi gen eksogen, yang secara langsung mempengaruhi hasil dan biaya biologis.
Pada tahap awal pengembangan biologis (pra-klinis atau fase 1/2), fokusnya adalah mengembangkan proses bebas hewan yang dapat diskalakan dengan hasil menengah dan memenuhi semua standar kualitas produk.
Saat berada di tahap akhir (fase 3 atau komersial), kami akan fokus pada hasil, kekuatan, skalabilitas, dan reproduktivitas, menghasilkan proses yang hemat biaya. Aktivitas yang menangani masalah ini adalah karakterisasi proses dan studi validasi proses. Sementara itu, alat quality by design (QbD) dan design of experiments (DoE) biasanya diterapkan.
Kata kunci: pengembangan proses, optimasi, dan validasi, proses fermentasi, fermentasi sel mikroba, fermentasi bakteri, fermentasi ragi, fermentasi padat tinggi, fermentasi strain rekayasa
Aplikasi: industri biopharmaceutical, obat manusia, obat hewan, vaksin, biologis molekul besar rekombinan, biologis rekombinan, reagen biologis
Solusi USP dari Yaohai Bio-Pharma
Mendapatkan manfaat dari lebih dari 10 tahun pengalaman dalam fermentasi mikroba, Yaohai Bio-Pharma memiliki keahlian untuk membantu menyelesaikan tantangan proses fermentasi. Kami dapat dengan cepat membangun strategi fermentasi padat tinggi untuk Escherichia coli (E. coli) sekresi periplasmik, ekspresi larut intraseluler atau tubuh inklusi, dan ekspresi ekstraseluler atau intraseluler pada ragi.
Layanan pengembangan fermentasi umum yang kami tawarkan mencakup:
- Desain proses fermentasi dilakukan dalam skala kecil 7L dengan mode fed-batch
- Validasi proses tiga batch dalam bioreaktor 7L
- Peningkatan skala proses menengah ke 30L/70L
Kami dapat secara fleksibel melakukan optimasi multi-parameter untuk memenuhi hasil atau proporsi yang diinginkan, menggunakan metode One-Time-A-Factor (OTAF) atau Design-of-experiments (DoE).
Parameter fermentasi utama tercantum sebagai berikut:
Komposisi media fermentasi bebas hewan
Tanpa antibiotik atau tidak, volume Inokulum
Suhu pertumbuhan, pH, Tingkat oksigen terlarut (DO)
Mode pemberian makan (mis., fed-batch)
Konsentrasi inducer (mis., IPTG, metanol), Titik induksi (berat basah sel/OD600),
Suhu induksi, Waktu induksi
dll.
Detail Layanan
| Layanan |
Alur proses |
| Kultur dalam Gelas Goyang (500 mL) |
Persiapan media bebas hewan → Kultur bibit mikroba → Kultur di penggoyang → Induksi → Panen |
| Kultur dalam Fermentor (7 L) |
Persiapan media bebas hewan → Kultur bibit mikroba → Fermentasi sel padat tinggi di bioreaktor 7L → Induksi → Panen |
| Pengendalian Kualitas Protein/Peptida |
Pra-pengolahan Ekspresi larut intraseluler: Sel mikroba dipanen dan dire suspensi → Penghancuran ultrasonik → Penghilangan sisa-sisa sel → Ekstrak kasar Ekspresi badan inklusi: Sel mikroba dipanen dan dire suspensi → Penghancuran ultrasonik → Persiapan badan inklusi → Ekstrak kasar Ekspresi larut ekstraseluler: Pengumpulan supernatan kultur → Pengkonsentrasian dan pertukaran buffer → Ekstrak kasar Analisis kualitas Ekstrak kasar sebagai sampel → Analisis protein target dengan SDS PAGE atau Western blotting (WB) |
| Kontrol Kualitas Plasmid |
Pra-pengolahan dan Analisis Kualitas Ekstraksi plasmid → Analisis DNA dengan elektroforesis gel agarosa |
Studi Kasus
Kami diberi tugas oleh pelanggan kami untuk meningkatkan hasil peptida hormon target dari 8 g/L menjadi 10 g/L.
Berdasarkan Desain Faktorial Penuh dan Desain Permukaan Respon dalam alat DoE, kami dengan cepat mengenali dan mengoptimalkan parameter fermentasi kunci. Dalam proses fermentasi padat-sel yang dioptimalkan, tingkat ekspresi meningkat menjadi 10 g/L.
Pengalaman kami
- Kami telah bekerja pada berbagai jenis inang mikroba, misalnya, E.Coli DH5α, TOP10, Trans10, BL21; Pichia pastoris (P. pastoris) SMD1168H, X-33, GS115, PichiaPink strain1/2/3/4; Saccharomyces cerevisiae (S. cerevisiae) dan Hansenula polymorpha (H. polymorpha) .
- Kami memiliki pengalaman dengan E. coli ekspresi sekresi periplasma, larut, dan inklusi tubuh, serta ekspresi intraseluler atau ekstraseluler ragi. Hasil inklusi tubuh dapat mencapai hingga 10g/L, sementara hasil protein larut berkisar antara 0,5 hingga 15g/L.
- Kami telah terlibat dalam pengembangan dan manufaktur berbagai molekul besar, termasuk vaksin subunit rekombinan, partikel virus mirip (VLPs), hormon (insulin, GLP-1, hormon pertumbuhan), sitokin (Interleukin-2/IL-2, IL-15, IL-21), faktor pertumbuhan (EGF, FGF, NGF), nanobodies/ antibodi single-domain (sdAbs), enzim, dll.
- Peralatan
sistem Fermentasi 7L*16
Analis Bio Cedex, Analis Bioproses
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
