Signifikansi Uji Potensi mRNA
Dengan pesatnya perkembangan vaksin dan terapi mRNA, diperlukan panel metode analisis khusus untuk menguji potensinya (mendefinisikan aktivitas biologisnya), yang melibatkan efisiensi translasi mRNA. Metode ini biasanya didasarkan pada transfeksi sel dan uji fungsional protein target.
Yaohai Bio-Pharma menawarkan pengujian potensi berbasis sel untuk zat obat mRNA atau produk LNP, termasuk transfeksi sel (sel 293T, HepG2, HeLa, K562, U937, Raw264.7, dll.) dan pengujian ELISA atau Western Blotting (WB).
Persyaratan Peraturan untuk Uji Potensi
Menurut pertimbangan peraturan WHO, “Potensi setiap lot vaksin akhir harus ditentukan dengan menggunakan metode fungsional kuantitatif dan tervalidasi yang sesuai. Uji potensi in vitro mungkin mencakup sistem transfeksi berbasis sel atau uji bebas sel.” Dan USP merekomendasikan “uji berbasis sel” untuk menguji potensi mRNA, yaitu ekspresi protein target.
Prosedur
Langkah 1. Transfeksi Berbasis Sel dengan mRNA atau mRNA-LNP
Sel-sel dikultur dan ditransfeksi dengan mRNA atau mRNA-LNP. Secara rinci, mRNA ditransfusikan setelah dicampur dengan reagen transfeksi, sedangkan mRNA-LNP langsung ditransfusikan ke dalam sel. Setelah 24-48 jam, supernatan yang mengandung protein yang diekspresikan diklarifikasi dengan sentrifugasi.
Langkah 2. Uji Fungsional Protein Target
Lakukan tes ELISA atau WB untuk menilai pengikatan fungsional protein target.
Studi kasus
Uji Potensi Sampel mRNA Berbasis Sel
Yaohai-BioPharma telah mengembangkan metode uji potensi berbasis sel untuk mRNA, yang melibatkan kultur sel, transfeksi sel, dan uji fungsional protein. Kami mentransfusikan eGFP mRNA, mCherry mRNA, luciferase mRNA, spike protein mRNA ke dalam sel 293T, dan mendeteksi protein target melalui sinyal fluoresensi, luminescent atau berwarna, WB, ELISA.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
TIDAK
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
