Dibandingkan dengan metode penutupan enzimatik dua langkah, metode penutupan co-transkripsional satu langkah dapat secara signifikan mengurangi alur proses. Metode ini berorientasi pada hasil dan melibatkan penambahan analog kap ke reaksi transkripsi in vitro (IVT). Analog kap dapat diperkenalkan pada awal transkripsi, dan mRNA dengan struktur kap dapat diperoleh setelah selesai transkripsi. Analog kap generasi ketiga saat ini dapat menghindari penutupan terbalik dan secara langsung menambahkan struktur Cap 1 ke produk transkripsi.
Untuk pertimbangan imunogenisitas mRNA in vivo dan efisiensi translasi, proses IVT sering menggunakan jenis tertentu dari NTP yang dimodifikasi, dan nukleotida dimodifikasi yang umum adalah pseudouridin (Ψ), N1-metil-pseudouridin (N1Ψ), dan 5-metil-sitosin (5mC).
Gambar: Diagram Reaksi Penambahan Kap Co-transkripsional mRNA
Detail Layanan
Layanan |
Detail Layanan |
Periode Pengiriman (hari kerja) |
Penambahan kap co-transkripsional |
Respons transkripsi in vitro (Clean Cap analog) |
1-2 |
| Modifikasi nukleotida (Ψ/N1Ψ/5mC) |
| Penghilangan templat DNA (DNase I) |
Optimasi kondisi IVT - opsional |
Desain dan optimasi komponen reaksi |
3-7 |
Fitur Kami
- Strategi Modifikasi Nukleotida yang Beragam
Beberapa strategi modifikasi nukleotida opsional dapat meningkatkan ekspresi protein.
- Sistem Reaksi yang Dioptimalkan
Mencapai rasio transkripsi tinggi dan efisiensi penutupan yang tinggi.
- Proses Penutupan yang Stabil
Mencapai tingkat penutupan lebih dari 95%.
- Kontrol Ketat terhadap RNase
Mencegah degradasi mRNA secara efektif dengan mengontrol ketat RNase dalam lingkungan eksperimen dan konsumsi.
Studi Kasus
Yaohai Bio-Pharma telah membangun platform proses penutupan ko-transkripsional yang matang, menggunakan kap analog bersih untuk menambah struktur Cap1 secara langsung sambil menghindari penutupan terbalik. Setelah penanganan sampel yang distandarkan dan deteksi elektroforesis kapiler (CE), tingkat penutupan mRNA protein fluoresen hijau ditingkatkan (eGFP) dapat mencapai lebih dari 95%.
efisiensi penutupan mRNA eGFP lebih dari 95%
MRNA eGFP dan mRNA mCherry yang disiapkan melalui penutupan koeskriptonal ditransfeksi ke dalam sel 293T secara terpisah, dan sinyal fluoresen yang kuat diamati setelah 48 jam, yang menunjukkan bahwa mRNA diekspresikan dengan efisien di sel 293T.
Ekspresi mRNA eGFP dan mRNA mCherry di Sel 293T
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
