Mengenai persiapan batch prekursor RNA, metode yang umum digunakan adalah transkripsi in vitro (IVT). Reaksi IVT menggunakan DNA plasmid linierisasi yang mengandung promotor T7 sebagai templat dan mensintesis prekursor RNA dengan nukleosida trifosfat (NTPs) sebagai substrat dengan adanya T7 RNA polimerase.
Metode siklisasi in vitro meliputi ligasi kimia, ligasi enzimatik dan metode permuted intron-exon (PIE). Ligasi kimia dan ligasi enzimatik cocok untuk siklisasi RNA yang lebih pendek. Ketika fragmen lebih besar dari 100 nt, laju siklisasi akan sangat menurun. Sebaliknya, metode nuklease berdasarkan sistem PIE dapat mencapai siklisasi sekuens 8 kb.
Di bawah katalisis guanosin trifosfat (GTP), struktur PIE mengalami siklisasi rangkaian ekstra-intron. Dikombinasikan dengan strategi yang masuk akal untuk meningkatkan laju siklisasi, Yaohai Bio-Pharma dapat mencapai siklisasi hingga urutan 4 kb, dengan efisiensi siklisasi lebih dari 80%.
Reaksi siklisasi RNA secara in vitro terjadi sebagai berikut:
Prekursor RNA disintesis melalui transkripsi in vitro, dan komponen PIE menyelesaikan penyambungan sendiri di bawah katalisis GTP untuk membentuk circRNA.
Detail Layanan
| Proses | Detail Layanan | Periode Pengiriman (Hari Kerja) |
| Transkripsi dan sirkulasi in vitro | Konfirmasi sistem reaksi | 1-2 |
| Reaksi transkripsi dan siklisasi in vitro |
| pencernaan RNase R |
| Optimalisasi reaksi | Komposisi reaksi, optimalisasi waktu | 2-5 |
Fitur kami
- Desain dan pengoptimalan pengujian yang ketat
Siklisasi RNA hingga 4 kb dapat dicapai.
- Efisiensi siklisasi tinggi
Tingkat siklisasi lebih dari 80% dapat dicapai melalui strategi optimasi urutan rasional.
- Kontrol ketat terhadap RNase
Melalui kontrol ketat terhadap RNases di lingkungan percobaan dan bahan habis pakai, degradasi RNA dapat dicegah secara efektif.
Studi kasus
Siklisasi in vitro dan pengayaan circRNA
Berdasarkan sistem PIE, Yaohai Bio-Pharma telah mengoptimalkan rangkaian circRNA, dengan tingkat siklisasi lebih dari 80% dengan elektroforesis gel agarosa (AGE). Menggunakan RNase R untuk memperkaya circRNA, hasil elektroforesis E-gel menunjukkan bahwa prekursor RNA linier dicerna, dan setelah pemurnian lebih lanjut, sebagian besar circRNA yang terpotong dapat dihilangkan. Solusi pemurnian ini dikembangkan sendiri oleh Yaohai Bio-Pharma.
Sirkulasi in vitro dan pengayaan circRNA
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
TIDAK
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
