Persiapan CircRNA memerlukan RNA linier sebagai bahan prekursor (RNA precursor) untuk siklisasi, dimana prekursor RNA biasanya dibuat menggunakan DNA plasmid linier sebagai template transkripsi dan ditranskripsi secara in vitro dengan bantuan T7 RNA polimerase.
DNA plasmid berkualitas tinggi sangat penting untuk transkripsi in vitro (IVT). Berdasarkan platform layanan persiapan plasmid matang, Yaohai Bio-Pharma dapat menyediakan layanan persiapan DNA plasmid linier (pDNA) dengan kemurnian tinggi dan standar untuk memastikan integritas produk IVT.
Detail Layanan
| Proses | Layanan Opsional | Detail Layanan | Periode Pengiriman (Hari Kerja) |
| Persiapan plasmid melingkar | Sintesis gen | Sintesis gen (pihak ketiga) | 7-10 |
| Amplifikasi plasmid | Amplifikasi plasmid | 2 |
| Ekstraksi plasmid |
| Persiapan plasmid linier | Linearisasi dan pemurnian plasmid | Linearisasi plasmid | 1 |
| Pemurnian DNA linearisasi |
| Kontrol kualitas DNA plasmid | Kemurnian konsentrasi | Spektrofotometri ultraviolet (UV). | 1-2 |
| Konformasi plasmid | Elektroforesis gel agarosa (AGE) |
| Elektroforesis kapiler (CE) -opsional |
| Identifikasi plasmid | Identifikasi enzim restriksi/ USIA |
Fitur kami
- Plasmid Templat Potong Bebas
Pemilihan metode linearisasi yang fleksibel
Optimalisasi metode ekstraksi dan pemurnian DNA untuk mencapai tingkat pemulihan yang tinggi.
- Kontrol Kualitas yang Ketat
Standar kontrol proses yang ketat, dengan tingkat konformasi superheliks sampel plasmid untuk penelitian lebih dari 80%.
- Proses Platform yang Matang
Layanan persiapan dan kontrol kualitas berstandar tinggi dan efisiensi tinggi untuk memenuhi kebutuhan eksperimental.
Studi kasus
Mengambil produk mCherry circRNA dari Yaohai Bio-Pharma sebagai contoh, rasio superkoil sampel plasmid templat transkripsi (tingkat penelitian) lebih dari 70%, dengan tingkat linierisasi mendekati 100%.
mCherry circRNA dibuat dengan plasmid linierisasi sebagai templat dan ditransfusikan ke dalam sel 293T. Ekspresi fluoresensi tingkat tinggi (fluoresensi merah) terdeteksi setelah 24 jam transfeksi, yang akan meningkat setelah 48 jam, dan masih dapat dideteksi pada hari ke 7 dan hari ke 14 setelah transfeksi.
Protein mCherry diekspresikan secara stabil dan efisien, dan kemurnian templat transkripsional dapat memenuhi persyaratan produk obat circRNA (DP) dengan kualitas tinggi.
Validasi ekspresi in vitro dari mCherry circRNA
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
TIDAK
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
