Data pemetaan peptida berbasis Kromatografi Likat-Mass Spektrometri (LC-MS) akan memberikan sejumlah besar informasi tentang struktur primer dan orde yang lebih tinggi dari protein asli dan rekombinan, termasuk cakupan urutan asam amino, modifikasi pasca-translasi (PTMs, misalnya, glikosilasi, oksidasi, deamidasi), ikatan disulfida, dll.
Yaohai Bio-Pharma menawarkan layanan analisis pemetaan peptida untuk protein target Anda dengan LC-MS, untuk mempercepat penelitian Anda tentang struktur protein.
Kami telah terlibat dalam Karakterisasi Struktur Protein dari berbagai molekul besar, termasuk Vaksin Subunit Rekombinan, Nanobodies/VHHs/ Antibodi Domain Tunggal (sdAbs), Fragmen Antibodi, Hormon/Peptida, Sitokin, Faktor Pertumbuhan (GF), Enzim, Kolagen, dll.
Persyaratan Regulasi untuk Pemetaan Peptida
Pedoman ICHQ6B merekomendasikan, “Penghancuran selektif produk menjadi peptida diskrit dilakukan menggunakan enzim atau bahan kimia yang sesuai dan fragmen peptida yang dihasilkan dianalisis dengan HPLC atau prosedur analitis lain yang sesuai. Fragmen peptida harus diidentifikasi sejauh mungkin menggunakan teknik seperti analisis komposisi asam amino, pengurutan N-terminal atau spektrometri massa (MS). Pemetaan peptida dari zat aktif atau produk obat (DP) menggunakan metode yang telah divalidasi dengan tepat adalah metode yang sering digunakan untuk mengonfirmasi struktur produk yang diinginkan untuk pelepasan batch.”
Metode Analitis
| Analisis |
Metode |
| Pemetaan Peptida |
Pencernaan Protease dan Kromatografi Cair-Mass Spectrometry (LC-MS) |
Prosedur Analitis
1. Reduksi dan Alkilasi
Tujuannya adalah untuk mengurangi jembatan disulfida dan memblokir tiol bebas yang dihasilkan. Pengurangan jembatan disulfida membantu membuka struktur protein sehingga pencernaan proteolitik menjadi lebih efisien. Langkah ini juga akan memutus jembatan antara rantai dalam kasus protein multirantai yang memiliki jembatan disulfida yang menghubungkan rantai-rantainya (misalnya, antibodi monoklonal, mAbs).
pencernaan Protein Menggunakan Enzim
Tujuannya adalah untuk memecah protein menjadi peptida. Kami memilih enzim berdasarkan urutan teoritis protein dan pengetahuan tentang pencernaan teoritis protein oleh enzim. Memilih enzim dengan cara ini, seharusnya menghasilkan analisis pemetaan peptida terbaik.
analisis Peptida yang Telah Dicerna Menggunakan Kromatografi Likuid Fase Balik Berkinerja Tinggi Dengan Deteksi Ultraviolet (UV) dan Spektrometri Massa Elektrospray (LC/ES-MS).
Pemisahan peptida berdasarkan polaritas menggunakan LC (fase balik-LC)
Ketika peptida terelusi dari kolom LC, spektrometer massa akan menghasilkan informasi massa bersama dengan informasi ion fragmen, yang memungkinkan kita menentukan informasi urutan. Kami menggunakan informasi urutan untuk mengonfirmasi identitas peptida dan memberikan informasi primer.
Kami juga dapat menghasilkan informasi fragmen dari peptida saat mereka memasuki sumber spektrometer massa dari kolom LC. Bergantung pada persyaratan studi, ini bisa berupa LC-MS/MS selektif atau non-selektif, yang dapat dianggap sebagai bentuk MS tandem.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
