اشغال محل N-گلیکوزیلاسیون یک ویژگی فیزیولوژیکی گلیکوپروتئین است و عمدتا N-گلیکان تولید می کند. خدمات تجزیه و تحلیل اشغال سایت N-گلیکوزیلاسیون Yaohai Bio-Pharma از طریق هضم، آزادسازی، غنی‌سازی و تجزیه و تحلیل با استفاده از کروماتوگرافی مایع-الکترواسپری یونیزاسیون طیف سنجی جرمی- طیف سنجی جرمی (LC-ESI-MS/MS) انجام می شود.
ما در ویژگی‌های ساختاری پروتئین مولکول‌های بزرگ مختلف، از جمله واکسن‌های زیر واحد نوترکیب، نانوبادی‌ها/VHHs/آنتی‌بادی‌های تک‌دامنه (sdAbs)، قطعات آنتی‌بادی، هورمون‌ها/پپتیدها، سیتوکین‌ها، فاکتورهای رشد (GF)، آنزیم‌ها، نقش داشته‌ایم. و غیره.
الزامات نظارتی برای اشغال محل N-گلیکوزیلاسیون
طبق دستورالعمل ICH Q6B، "برای گلیکوپروتئین ها، محتوای کربوهیدرات (قندهای خنثی، قندهای آمینه و اسیدهای سیالیک) تعیین می شود. علاوه بر این، ساختار زنجیره‌های کربوهیدراتی، الگوی الیگوساکاریدی (پروفایل شاخک)، و محل(های) گلیکوزیلاسیون زنجیره پلی پپتیدی به بهترین میزان ممکن تجزیه و تحلیل می‌شوند.
روش تحلیلی
| تحلیل و بررسی |
مواد و روش ها |
| اشغال محل N-گلیکوزیلاسیون |
LC-MS پس از هضم دگلیکوزیلاز و پروتئاز |
جراحی ها
1. هضم پروتئین پروتئین ها برای تولید قطعات کوچک پپتیدی.
2. آزادسازی N-گلیکان با استفاده از اندوگلیکوزیداز H یا PNGase F. اندوگلیکوزیداز H پیوند بین دو باقیمانده GlcNAc را در هسته گلیکان های متصل به N قطع می کند، در حالی که PNGase F یک گلیکوآمیداز است که پیوند بین GlcNAc و Asn را قطع می کند و کل آن را آزاد می کند. زنجیره قند و تبدیل Asn به Asp با افزایش جرم 1-Da.
3. غنی سازی N-گلیکوپپتید از طریق HILIC (کروماتوگرافی مایع برهمکنش هیدروفیل)
4. تجزیه و تحلیل اشغال محل گلیکوزیلاسیون متصل به N با استفاده از LC-ESI-MS/MS.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
نه
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
