اهمیت توسعه فرآیند پس‌ازآبکاری (DSP)
کل آبکار کوده حاوی پروتئین هدف یا پلاسمید، به همراه آلودگی‌های مرتبط با محصول و فرآیند مانند اجسام گردآوری‌شده، زیربنای سلولی میکروبی، پروتئین‌های سلول میزبان (HCP)، DNA سلول میزبان (HCD)، اندوتокسین و آنتی‌بیوتیک است.
بنابراین، طراحی یک فرآیند DSP کارآمد برای پاک‌سازی، برای حذف آلودگی‌های خاص و تولید مواد دارویی با درجه پاکیزگی بالا و کیفیت بالا ضروری است. علاوه بر این، بهینه‌سازی فرآیند پاک‌سازی می‌تواند به افزایش بازیابی محصول، کاهش هزینه‌ها و بهبود مقیاس‌پذیری و تکرارپذیری فرآیند کمک کند.
کلمات کلیدی: توسعه فرآیند، بهینه سازی و اعتبارسنجی، فرآیند تصفیه، کروماتوگرافی، حذف ناخالصی ها، حذف HCP، حذف HCD، حذف اندوتокسین، دناتوراسیون پروتئین و بازچیدن، مونتاژ VLP، ترکیب
کاربرد: صنعت بیوفارما، داروی انسانی، داروی حیوانی، واکسن، بیولوژیک های ترکیبی بزرگ، بیولوژیک های ترکیبی، عامل زیستی
راه حل های DSP شرکت یائوهای بیو-فارما
ما تجربه گسترده ای در جدا کردن پروتئین هدف یا پلاسمیدها از ماتریس های پیچیده با توسعه و بهینه سازی فرآیندهای تصفیه پس از جریان داریم. انواع مختلف عملیات واحد برای تصفیه بیولوژیک ها وجود دارد، شامل جداسازی، فیلتراسیون، هموگنیزاسیون، لیزیس قلیایی، ابرفیلتراسیون، ترکیب، دناتوراسیون پروتئین و بازچیدن، کروماتوگرافی، و غیره.
خدمات توسعه تصفیه موجود ما شامل:
- توسعه کل فرآیند تصفیه از جمع آوری سلول یا سپرناانت تا مواد فعال نهایی.
- بهینه‌سازی فرآیند تصفیه بر اساس ناخالصی‌های مرتبط با محصول و فرآیند برای افزایش کیفیت و ایمنی محصول، به عنوان مثال، HCP، HCD، اندوتокسین.
- تعریف و بهینه‌سازی پارامترهای کلیدی در یک یا چند عملیات واحد، شامل شکستن سلول، فیلتراسیون جریان مماسی، صفحه‌بندی رزین، کرومتوگرافی، دناپارش پروتئین و بازپیچش آن، و غیره.
- بهینه‌سازی فرآیند از لحاظ کیفیت، بازده، بازیابی، هزینه و قابلیت مقیاس‌بندی.
- اعتبارسنجی فرآیند تصفیه پس‌ازدرمان.
- ارزیابی برد پارامترها بر اساس ریسک و طراحی آزمایش‌ها (DoE) در مدل‌سازی فرآیند.
جزئیات خدمات
Platforms استاندارد تصفیه پروتئین یا پلاسمید بر اساس چند مرحله تصفیه خام و کمتر از 4 مرحله کرومتوگرافی، شامل گرفتن، تصفیه میانی، و پُلیشینگ است.
| جزئیات خدمات |
عملیات واحد |
پارامترها |
| تصفیه خام |
سرنگ‌زنی |
سرعت چرخش، زمان |
| همگن‌سازی فشار بالا |
محتوای کل جامد، فشار، چرخه‌ها |
| لیز به روش قلیایی پیوسته |
نسبة سلول‌های بازگردانده شده به محلول لیز، زمان لیز |
| فیلتراسیون جریان مماسی |
مواد ممبران و اندازه گذرگاه، نرخ جریان تغذیه، فشار عبور از ممبران (TMP)، نسبت حجم فیلترات به مساحت ممبران |
| تبلور |
نوع و غلظت مواد تبلورکننده، افزودنی، pH، دما، زمان |
| گشایش و بازگویی |
محلول کردن پروتئین بدن شامل |
Carthy از ترکیبات (مثل، یوره، گوآنیدین HCl، صابون یونی قوی)، صابون ها (مثل، سدیم دودسیل سولفات، SDS)، عوامل کاهنده (مثل، Dithiothreitol، DTT)، عوامل چل کننده (Ethylenediaminetetraacetic acid، EDTA)، دما، زمان |
| بازگردانی پروتئین |
روش های بازگردانی ( Verdilution، dialysis یا SEC refolding)، غلظت پروتئین ها، BUFFERS، pH، دما، زمان، عوامل اکسیده کننده و کاهنده (مثل، گلوتاتیون، GSH/ گلوتاتیون اکسیده شده، GSSH، DTT/GSSH، سیستئین/سیستین)، افزودنی های مولکول کوچک (L-Arginine، Urea، Guanidine/HCl، و صابون) |
| گرفتن، تصفیه میانی و پالیش |
AC (کروماتوگرافی نزدیکی) |
چند نوع رزین/ستون کروماتوگرافی (مثل، AC، IEX، HIC، SEC، RPC، MMC)، طول و قطر ستون، ترکیب بفر، حجم تزریق، ترکیب فاز موبایل (جذب و جدا)، pH، نرخ جریان، شرایط جذب، شستشو و الیوشن. |
| IEX (کروماتوگرافی نمایش یونی یا آنیون) |
| HIC (کروماتوگرافی اثر مهارپذیری) |
| حذف نمک و یا کروماتوگرافی استبعاد اندازه (SEC) |
| RPC (کروماتوگرافی فاز معکوس) |
| MMC، کروماتوگرافی حالت ترکیبی |
مطالعه موردی
مورد 1
ما به کار گرفته شده‌ایم تا فرآیند تمیزکاری پس‌انداز را توسعه دهیم و بهینه کنیم تا خالصی پروتئین از ۸۵٪ به ۹۰٪ افزایش یابد در حالی که مراحل کروماتوگرافی کاهش می‌یابد.
یائوهای یک فرآیند تمیزکاری قوی و مقیاس‌پذیر با سه مرحله کروماتوگرافی برای پروتئین هدف، یک آلرژی بکتریایی، تحویل داد. و خالصی نهایی به ۹۵٪ رسید.
مورد 2
یائوهای توسط مشتری ما منصوب شد تا فرآیند حذف اندوتокسین واحدهای شبیه ویروس (VLP) را بهینه کند.
تیم ما بهینه‌سازی پارامترهای کروماتوگرافی را انجام داد و مواد دارویی با خالصی ۹۸٪ و باقیمانده اندوتوکسین ۱۲٫۸EU/مگ تهیه کرد.
تجربه‌های ما
- ما در توسعه و تولید مولکول‌های بزرگ مختلف، از جمله واکسن‌های زیرواحد بازتولیدی، VLPs، هورمون‌ها (اینسولین، GLP-1، هورمون رشد)، سیتوکاین‌ها (انترلئوکین-2/IL-2، IL-15، IL-21)، فاکتورهای رشد (EGF، FGF، NGF)، نانوантی‌بادی/انتی‌بادی‌های تک دامنه (sdAbs)، آنزیم‌ها، و غیره، شرکت داشته‌ایم.
تجهیزات
ما از سیستم‌های پیشگام صنعتی AKTA Pure، AKTA Avant و HPLC تهیه‌ای برای انجام انواع روش‌های کروماتوگرافی، شامل کروماتوگرافی وصالت، تعویض یون، تعامل هیدروفروبیک، مرحله معکوس و کروماتوگرافی استثنا اندازه استفاده می‌کنیم.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
