پروتئین‌های بازسازی شده اغلب دیده می‌شود که اکسیداسیون زنجیره‌های جانبی اسیدهای آمینوی نمایان، مانند تریپتوفان (Trp) و متیونین (Met)، خواص فیزیکوشیمیایی پروتئین‌ها را تغییر می‌دهد. این تغییرات ممکن است به نوبه خود منجر به تغییر در عملکرد زیستی پروتئین‌های تحت تأثیر شوند، مانند از دست دادن قابلیت جذب، کاهش فعالیت انزیمی و حذف غیرمنتظره سریع. پروتئین‌ها هدف مهمی برای واکنش‌های اکسیداتیو هستند زیرا به سرعت با اکسیدان‌ها واکنش می‌دهند و در سلول‌ها، بافت‌های بیرونی سلول و مایعات بدن فراوان هستند.
بنابراین، نظارت بر اکسیداسیون پروتئین برای توسعه موفق داروهای زیستی اهمیت دارد.
شرکت یائوهای بیو-فارما خدمات تحلیل اکسیداسیون اسیدهای آمینو را ارائه می‌دهد که به شما اجازه می‌دهد اکسیداسیون اسیدهای آمینو را با استفاده از کروماتوگرافی مایع-طیف‌سنجی جرمی (LC-MS) تعیین کنید.
ما در توصیف ساختار پروتئین مولکول‌های بزرگ مختلف، از جمله واکسن‌های زیرواحد بازتولیدی، نانوантی‌بادی‌ها/ VHHs/ آنتی‌بادی‌های یک‌دامنه (sdAbs)، شکسته‌های آنتی‌بادی، هورمون‌ها/پپتیدها، سیتوکاین‌ها، عوامل رشد (GF)، انزیم‌ها، کالاژن‌ها و غیره، دخالت داشته‌ایم.
شرایط نظارتی برای اکسیداسیون اسیدهای آمینه
بر اساس راهنمای ICH Q6B، فرم‌های اکسیده شده ممکن است توسط روش‌های تحلیلی مرتبط کروماتوگرافی، الکتروفورز و یا سایر روش‌های تحلیلی (مانند کروماتوگرافی مایع عملکرد بالا (HPLC)، الکتروفورز کپیلاری، طектروفرتری جرم، دوگانگی دایره‌ای) شناسایی و توصیف شوند.
روش‌های آنالیز
| تحلیل |
روش‌ها |
| اکسیداسیون اسید آمینه |
LC-MS، کروماتوگرافی مایع عملکرد بالا فاز معکوس (RP-HPLC) یا کروماتوگرافی مایع عملکرد بالا تعامل هیدروفوبیک (HIC-HPLC) و طектروفرتری جرم |
رویه‌های تحلیلی
۱. آماده‌سازی نمونه
۲. LC-MS
۳. تحلیل داده‌ها
واژه‌های تریپتوفان (Trp) به خصوص به دلیل واکنش پذیری بالا اندول آروماتیک با گونه‌های اکسیژن فعال، معرض اکسیداسیون قرار می‌گیرند. اکسیداسیون Trp نیازمند آشکار شدن برخی از وایژه‌های Trp است که معمولاً در ساختار سه‌بعدی پروتئین در داخل قرار دارند.
با این حال، هنگامی که وایژه‌های Trp اکسیده می‌شوند، می‌توانند به انواع مختلفی از محصولات تبدیل شوند که خاصیت‌های بسیار متفاوتی از Trp اصلی دارند. راه‌حل عمده برای اکسیداسیون Trp شامل تشکیل N-فورمال‌کینورینین (تفاوت جرم: +32) است.
تریپتوفان نیست، امینو اسید متیونین نیز یکی دیگر از امینو اسیدهای متداولی است که اکسیده می‌شود. اتم سولفور در وایژه Met می‌تواند یک یا دو اتم اکسیژن را قبول کند که منجر به تشکیل سولفoksید (تفاوت جرم: +16) یا سولفون (تفاوت جرم: +32) می‌شود، به ترتیب. این تغییرات به دلیل معمولاً آشکار شدن بالا Met در سطح، نسبتاً متداول است.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
