Hej derude. Har du nogensinde undret dig over, hvordan forskere kan klone et RNA? RNA er denne specielle molekyle, som vi finder i vores celler, og det gør en masse ting for at lave proteiner, og disse proteiner er der, så vores krop kan udføre alle de rigtige ting. I denne aflevering vil vi gennemgå den langt mere nyfærdige protokol, som forskere bruger: In vitro transkription. Og alt det betyder er, at forskere tager RNA og laver masser af det i et prøveglase (som er disse små flasker, som laboratorier bruger), så lad os komme ind på hver enkelt trin her.
Efter at have fuldendt min tidligere indlæg, realiseerede jeg mig, at det sidste måske var lidt torrere - kom med og deltag i den fede labopplevelse; så, for at holde formen op, nu hvor du er godt og virkelig på den sjove (sic RNA-lavning) tog: Hvad for reaktanter og hvad vil du have brug for til din EF?? For at opnå dette, skal vi have specielle proteiner kaldet enzymers, ligesom dem fra Yaohais produkt Recombinant Midkine Fremstilling . Det katalyser kemiske reaktioner, disse enzym hjælper med opbrud. Så nu mangler vi bare vores stykke DNA. Denne funktion er det DNA, vi bruger som skabelon til at kopiere vores RNA fra. Yderligere reguleringsekvenser i RNA, nemlig nukleotider, er også nødvendige. Disse nukleotider er ligesom små byggesten, der skal samles for at lave RNA'en. Vi bruger også korte rør med lille diameter til at smage evalueringen ind i andre. Til sidst har vi brug for en maskine (en thermocycler), der sørger for, at vores reaktioner er på den rigtige temperatur. Ydermere kan vi måske have brug for nogle værktøjer og produkter til bestemte eksperimenter.
Her adskiller sig tingene, vi har en RNA-strand og nu ønsker vi at have flere kopier af den, også Produktion af konjugerede VLP-vacciner udviklet af Yaohai. Måden at opnå dette på er at bruge en anden enzym; T7 RNA polymerase. Den unikke enzym genkender f.eks. specifikke områder inden for RNA'en. Et springende konus for at lave mange flere kopier af RNA i det følgende. På dette tidspunkt vil der blive tilføjet mere til RNA-stranden af T7 RNA polymerase indtil en masse transkript er blevet oprettet, eller indtil vi siger det skal stoppe.
Efter at vi har isoleret RNA så godt som muligt, rul ned for at se, hvordan man renser op og gemmer RNA til fremtidig brug. Rhoades: Nogle af disse metoder er lidt mere ekstreme i forhold til at isolere RNA - du ville ikke altid bruge det, men nogle gange til bestemte typer eksperimenter er det nødvendigt. Når vores RNA er fri for enhver forurening, kan det gemmes i fryseren. På denne måde er det sikret, og vi kan derefter bruge det senere i de forskellige eksperimenter.
Kvalitet af startmateriale: sørger for, at din DNA-skabelon er ren og ikke alt for skadet. Du kan også supplere med frisk rekonstituerede nukleotider og nyligt omtopede enzymers for at maksimere chancen for et succesfuldt eksperiment.
Finjustering af betingelser Alle enzymmer og deres nukleotider fungerer bedre ved en bestemt temperatur og pH-værdi inde i dit legeme, ligesom Yaohais. Rød Fluorescerende mRNA . Justér nuance lidt mellem betingelserne, indtil du finder nøglen til din unikke opsætning.
Reverse transcriptase er et usædvanligt enzym, da det laver en DNA-kopi fra et RNA-molekyle. Vi brugte både DNAs og et DNA-skabelon (det cDNA) som input til vores in vitro-transkriptionsmetode for at generere RNA. Imidlertid vil forskere i de fleste eksperimenter normalt ønske at transkribere DNA til RNA. Reverse transcription får sit navn på samme måde. mRNA poly-A Fordelningstest lavet af Yaohai. Det er et uerstatteligt værktøj over hele videnskaben - fra at studere RNA-molekyler inden i celler til at producere komplementære DNA-strandre til yderligere eksperimenter.
Ekte eksperimenter, hvor RNA er et af de mest almindelige molekylære værktøjer, sammen med Yaohais produkt VLP-vaccinproduktion i E. coli . Kvantitative analyser: Disse test kan afsløre mængden af enhver bestemt molekyle, der er til stede i et prøvestykke. For eksempel kan forskere syntetisere en in vitro transkriptforberedelse af RNA-kopier afledt fra et målret gene inden for en celle. Diagnosticeringen kan derefter analysere disse kopier, og hvis de leder efter RNA, kan diagnosticeringen udføre en polymerase kedreaktion (PCR) for at forstærke disse kopier i et prøve. Dette gør det muligt for forskere at se, hvordan gener udtrykkes på celler, og tillader endda nogle ekstremt højdegydende analyser, såsom tilstedeværelsen af en bakteriel eller viral infektion, og diagnosticere arvssygdomme.
in vitro Transcript Protocol er en førende CDMO inden for mikrobielle biologiske produkter. Vores fokus har været på mikrobproduced vacciner og terapeutika, der er egnet til menneskelig, veterinær og hunde sundhedspleje. Vi har de mest avancerede RD-platforme og produktions teknologi, som dækker hele proceduren fra udviklingen af mikroorganisme-stammer og cellebanker, til proces- og metodeudvikling, til kommerciel og klinisk produktion, hvilket sikrer en succesfuld levering af innovative løsninger. Gennem tiden har vi opbygget et veldokumenteret kendskab til mikrobielt baseret bioprosessering. Over 200 projekter er blevet gennemført med succes, og vi hjælper vores kunder med at overholde regler som dem fra US FDA og EU EMA. Vi hjælper dem også med at navigere Australia TGA og China NMPA. Vores professionelle ekspertise og omfattende erfaring gør det muligt for os at hurtigt reagere på markedets krav og levere tilpassede CDMO-tjenester.
Yaohai Bio-Pharma har erfaring inden for produktion af biologiske stoffer, der er oprettet ved hjælp af in vitro Transcript Protocol. Vi tilbyder tilpassede RD- og produktionsløsninger, samtidig med at vi sikrer, at der ikke er nogen risici. Vi har været involveret i forskellige modaliteter såsom subenheds-vacciner, rekombinante peptider, hormoner, cytokiner, vækstfaktorer, enkelt-domæne-antistoffer, enzymmer, plasmid DNA MRNA og meget mere. Vi er specialister inden for mange mikroorganismer, herunder gær ekstracellulær og intracellulær sekretion (opbringelse op til 15g/L) samt bakterier intracellulær løselig og inklusionslegeme (opbringelser op til 10g/L). Vi har også etableret en BSL-2 fermentationsplatform til fremstilling af bakterielle vacciner. Vi fokuserer på at forbedre processerne, øge produktydelsen og reducere produktionsomkostningerne. Ved hjælp af et stærkt teknisk team kan vi sikre hurtig og pålidelig projektudlevering, hvilket vil få dit produkt på markedet hurtigere.
Yaohai Bio-Pharma, en af de 10 største producenter af biologiske produkter, specialiserer sig i mikrobiel fermentering. Vi har opført et moderne anlæg med stærke forsknings- og udviklingskapaciteter samt avanceret udstyr. Vi har fem stofproduktionslinjer, der overholder GMP-kravene til mikrobiel fermentering og renning. Vi har også to automatiserede fyldningslinjer til kartidge, flasger og forudfyldte sprøjte. De tilgængelige fermenteringsstørrelser varierer fra in vitro Transcript Protocol til 2000L. Specificeringsområdet for fyldning af en flaske ligger mellem 1ml og 25ml. Specificeringsområdet for forudfyldte sprøjte eller kartidge ligger mellem ca. 1-3ml. Vores cGMP-kompatible produktionsanlæg sikrer en konstant levering af kliniske prøver såvel som kommersielle produkter. Vores anlæg producerer store molekyler, der leveres verden over.
Yaohai BioPharma er en af de 10 største mikrobiologiske CDMO'er, der inkluderer in vitro Transkriptionsprotokol samt reguleringsspørgsmål. Vi har et kvalitetsmanagement-system, der overholder de nuværende GMP-standarder og globale regler. Vores team af eksperter inden for reguleringsspørgsmål er dygtige i globale reguleringssystemer for at accelerere lanceringen af biologiske produkter. Vi sikrer sporbar produktion, kvalitetsprodukter og overholdelse af reglerne fra US FDA og EU EMA. Australia TGA og Kina NMPA er også tilfredse. Yaohai BioPharma har succesfuldt gennemført den lokale audit af Den Europæiske Unions Kvalificerede Person (QP) for vores GMP-kvalitetsystem og produktion facilitet. Desuden har vi bestået de første certificeringsaudits af ISO9001 KvalitetsManagementSystem, ISO14001 MiljøManagementSystem og ISO45001 ArbejdspladsHelse-og-SikkerhedsManagementSystem.