Hej med dig. Har du nogensinde spekuleret på, hvordan forskere kan klone et RNA? RNA er dette specielle molekyle, som vi finder i vores celler, der gør en masse ting for at lave proteiner, og proteinerne er der, så vores krop kan gøre alt det rigtige. I dette afsnit vil vi gennemgå den langt mere kuriøse protokol, som forskere har brugt: In vitro-transskription. Og alt det betyder er, at forskere tager RNA og laver meget af det i et reagensglas (som er denne lille krukke, som laboratorier bruger), så lad os komme ind på hvert trin her.
Efter at have afsluttet mit forrige indlæg, indså jeg, at det sidste måske var et lille tør-kom-vær med-det-sjov-i-det-våde-lab-indlæg; så, i overensstemmelse med formen nu, hvor du er godt og grundigt på det sjove (sic RNA-fremstilling) tog: Hvilke reagenser andc skal bruge til din EF?? For at opnå dette vil vi kræve specielle proteiner kaldet enzymer, identiske med Yaohais produkt Rekombinant Midkine Manufacturing. Det katalyserer de kemiske reaktioner, disse enzymer hjælper med nedbrydningen. Så nu mangler vi bare vores smule DNA. Denne funktion er det DNA, vi bruger som skabelon til at kopiere til vores RNA. Yderligere regulatoriske sekvenser i RNA, nemlig nukleotider, er også nødvendige. Disse nukleotider er som små byggesten, der skal samles for at lave RNA'et. Vi anvender også korte rør med lille diameter til at ælte smagsvurderingen ind i andre. Til sidst har vi brug for en maskine (en termocykler), der sørger for, at vores reaktioner har den rigtige temperatur. Derudover kan vi kræve nogle få værktøjer og produkter til visse eksperimenter.
Så her divergerer tingene, vi har fået én RNA-streng og nu vil vi gerne have flere kopier af den, også Konjugat VLP-vaccinefremstilling udviklet af Yaohai. Måden at opnå at bruge et andet enzym; T7 RNA polymerase. Dette unikke enzym genkender for eksempel specifikke områder i RNA'et. en hoppekegle til at lave mange flere kopier af RNA i processen. På dette tidspunkt vil der blive tilføjet mere til RNA-strengen af T7 RNA-polymerasen, indtil en masse af transkript er blevet skabt, eller indtil vi fortæller, at det skal stoppe.
Når vi har isoleret RNA'et så meget som muligt, skal du rulle længere ned for at se, hvordan du renser op og opbevare RNA'et til fremtidig brug. Rhoades: Nogle af disse metoder er lidt mere på den ekstreme side med hensyn til at isolere RNA - du ville ikke altid bruge det, men nogle gange til visse typer eksperimenter er det nødvendigt. Når først vores RNA er fri for forurenende stoffer, kan det opbevares frosset. På denne måde er dette sikkert, og vi kan så bruge det senere i de forskellige eksperimenter.
Kvaliteten af udgangsmaterialet: Sørg for, at din dna-skabelon er ren og ikke helt brændt op. Du kan også supplere med frisk rekonstituerede nukleotider og nyoptøede enzymer for at maksimere chancerne for et vellykket eksperiment.
Finjusterende betingelser Alle enzymer og deres nukleotider fungerer bedre ved en specifik temperatur og pH inde i din krop, såvel som Yaohai'erne Rødt fluorescerende mRNA. Juster nu nuancen en lille smule mellem betingelserne, indtil du når dertil, hvor nøglen er til din unikke opsætning.
Revers transkriptase er et usædvanligt enzym, da det laver en DNA-kopi fra et RNA-molekyle. Vi brugte både DN'er og en DNA-skabelon (cDNA'et) som input til vores in vitro-transkriptionsmetode til generering af RNA. Men i de fleste eksperimenter vil forskere gerne transskribere DNA til RNA. Omvendt transskription er, hvor det får sit navn det samme som mRNA poly-A distributionstest lavet af Yaohai. Det er et uvurderligt værktøj på tværs af videnskaben - Fra at studere RNA-molekyler inde i celler til at producere komplementære DNA-strenge til yderligere eksperimenter.
Eksperimenter fra det virkelige liv, hvor RNA er et af de mest brugte molekylære værktøjer sammen med Yaohais produkt VLP-vaccineproduktion i E. coli. Kvantitative assays: Disse tests kan afsløre mængden af et hvilket som helst specifikt molekyle, der er til stede i en prøve. For eksempel kan forskere syntetisere et in vitro-transkriptpræparat af RNA-kopier afledt af et målrettet gen placeret i en celle. Diagnostikeren kan derefter analysere for disse kopier, i det tilfælde, hvor de er. leder efter RNA, kan diagnostikeren køre en polymerasekædereaktion (PCR) for at amplificere disse kopier i et par. Dette gør det muligt for forskere at se, hvordan gener udtrykkes på celler, og giver endda mulighed for nogle ekstremt høj-throughput assays, såsom tilstedeværelsen af en bakteriel eller viral infektion, og diagnosticere genetiske lidelser.
in vitro Transcript Protocol er en førende CDMO inden for mikrobielle biologiske lægemidler. Vores fokus har været på mikrobiel-producerede vacciner og terapeutiske midler, der er velegnede til sundhedspleje hos mennesker, veterinær og kæledyr. Vi har de mest banebrydende RD-platforme og produktionsteknologi, som dækker hele proceduren begyndende med udviklingen af mikrobielle stammer og cellebanking, til proces- og metodeudvikling, til kommerciel og klinisk produktion, som sikrer succesfuld levering af innovative løsninger. Over tid har vi oparbejdet stor viden om mikrobiel-baseret bioprocessering. Over 200 projekter er blevet gennemført med succes, og vi hjælper vores kunder med at overholde regler som f.eks. US FDA og EU EMA. Vi hjælper dem også med at navigere i Australien TGA og Kina NMPA. Vores professionelle ekspertise og omfattende erfaring giver os mulighed for hurtigt at reagere på markedets krav og levere skræddersyede CDMO-tjenester.
Yaohai Bio-Pharma har erfaring med produktion af biologiske stoffer skabt ud fra in vitro transkriptionsprotokol. Vi tilbyder skræddersyede RD- og produktionsløsninger, mens vi sikrer, at der ikke er nogen risici. Vi har været involveret i forskellige modaliteter såsom rekombinante underenhedsvacciner, peptidhormoner, cytokiner, vækstfaktorer, enkelt-domæne antistoffer enzymer, plasmid DNA MRNA og mange flere. Vi er specialister i mange mikroorganismer, herunder gær ekstracellulær og intracellulær sekretion (udbytter op til 15g/L) samt bakterier intracellulært opløseligt og inklusionslegeme (udbytter så højt som 10g/L). Vi har også skabt en BSL-2 fermenteringsplatform til at skabe bakterielle vacciner. Vi fokuserer på at forbedre processer, øge produktudbyttet og reducere produktionsomkostningerne. Ved at bruge et stærkt teknologiteam kan vi sikre hurtig og pålidelig projektlevering, der bringer dit produkt hurtigere på markedet.
Yaohai Bio-Pharma, en top 10 producent af biologiske produkter, har specialiseret sig i mikrobiel fermentering. Vi har bygget et moderne anlæg med robuste RD-kapaciteter og avanceret udstyr. Vi har fem fremstillingslinjer for lægemiddelstoffer, der overholder GMP-kravene til mikrobiel fermentering og oprensning. Vi har også to automatiske udfyldningslinjer til patroner, hætteglas og fyldte sprøjter. Gæringsskalaerne, der er tilgængelige til brug, spænder fra in vitro Transcript Protocol til 2000L. Specifikationerne for påfyldning af et hætteglas går fra 1 ml op til 25 ml. Specifikationerne for fyldt sprøjte eller patron spænder fra ca. 1-3 ml. Vores cGMP-kompatible produktionsanlæg sikrer konstant forsyning af kliniske prøver såvel som kommercielle varer. Vores anlæg producerer store molekyler, som sendes til kloden.
Yaohai BioPharma er en Top 10 mikrobiel CDMO, der inkorporerer in vitro transkriptionsprotokol samt regulatoriske forhold. Vi har et kvalitetsstyringssystem, som er i overensstemmelse med gældende GMP-standarder samt globale regler. Vores team af regulatoriske eksperter er dygtige i globale regulatoriske rammer for at fremskynde biologiske lanceringer. Vi sikrer sporbare produktionsprocesser kvalitetsprodukter, samt overholdelse af reglerne fra US FDA og EU EMA. Australien TGA og Kina NMPA er også tilfredse. Yaohai BioPharma har med succes bestået revisionen på stedet af EU's Qualified Person (QP) for vores GMP-kvalitetssystem såvel som vores produktionsanlæg. Desuden har vi godkendt de første certificeringsrevisioner af ISO9001 kvalitetsstyringssystem, ISO14001 miljøstyringssystem og ISO45001 arbejdsmiljøledelsessystem.