5'-endeafdækning er en væsentlig modifikation af mRNA. mRNA'er med cap-strukturer, især Cap1-strukturer, letter mRNA'er med at undgå medfødte immunresponser in vivo, hvilket resulterer i effektiv proteintranslation.
Enzymatisk capping (to-trins-metoden) er den konventionelle metode til mRNA-capping, svarende til capping-processen i eukaryote organismer. Under påvirkning af en række enzymer er 7-methylguanin (m7G) bundet til 5'-enden af mRNA gennem en 5'-5' triphosphatbinding og gennemgår methyleringsmodifikation for at danne cap-strukturen Cap 1 (m7GpppN).
Diagram over naturlig hættestrukturdannelse
Det enzymatiske capping-reaktionsflow er som følger:
Lineariseret plasmid-DNA anvendes som skabelon for in vitro-transkription (IVT) i nærvær af T7-polymerase, og mRNA med en 5'-ende-cap-struktur dannes efter en et-trins oprensning under anvendelse af vaccinia-capping-enzymet og 2'-O -methyltransferase.
Tjenester detaljer
Valgfri service |
Service detaljer |
Leveringsperiode (dag) |
mRNA enzymatisk afdækning |
Enzymatisk capping-reaktion |
1 |
Optimering af capping-reaktion - valgfrit |
Reaktionskomponentdesign og optimering |
3 ~ 7 |
Vores egenskaber
- Design og optimering af capping-reaktionskomponenten
Capping-reaktionskomponenten er optimeret, og produktionen af mRNA-transkript øges kraftigt.
- In vitro ekspressionsverifikation
Det capped mRNA transficeres ind i 293T-celler, og ekspressionen af målproteinet kan påvises.
- Stringent kontrol af RNase
Gennem stringent kontrol af RNaseson-forsøgsmiljøet og forbrugsstoffer forhindres mRNA-nedbrydning effektivt.
Case study
Yaohai Bio-Pharmas mRNA-platform har bygget en perfekt capping-reaktionsproces.
For eGFP-mRNA, et mRNA-præprodukt fremstillet ved enzymatisk afdækning, kan et eGFP-fluorescenssignal (grøn fluorescens) på et højt niveau observeres efter transficering af 293T-celler i 24 timer, som påvises af Western Blot (WB), hvilket viser, at målproteinforstærket grønt fluorescerende protein (eGFP) kan udtrykkes effektivt in vitro.
Ekspression af enzymatisk lukket eGFP-mRNA i 293T-celle
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
INGEN
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
