Sammenlignet med den to-trins enzymatiske dækning, kan den et-trins co-transkriptionelle dækning reducere procesflowet betydeligt. Metoden er resultatorienteret og involverer tilføjelse af cap-analoger til in vitro transkriptions (IVT) reaktionen. Cap-analoger kan introduceres ved starten af transkription, og mRNA med cap-struktur kan opnås efter afslutning af transkription. Nuværende tredjegenerations cap-analoger kan undgå omvendt dækning og direkte tilføje Cap 1-struktur til transkriptionsproduktet.
Af hensyn til mRNA in vivo immunogenicitet og translationseffektivitet vedtager IVT-processen ofte visse typer modificerede NTP'er, og almindelige modificerede nukleotider er pseudouridin (Ψ), N1-methyl-pseudouridine (N1Ψ) og 5-methylcytosin (5mC) .
Figur: Diagram over mRNA Co-transkriptionel og capping-reaktion
Service detaljer
Service |
Service detaljer |
Leveringsperiode (hverdag) |
Co-transkriptionel dækning |
In vitro transkriptionel respons (Clean Cap analog) |
1-2 |
| Nukleotidmodifikationer (Ψ/N1Ψ/5mC) |
| Fjernelse af DNA-skabelon (DNase I) |
IVT tilstandsoptimering - valgfrit |
Reaktionskomponentdesign og optimering |
3-7 |
Vores egenskaber
- Diversificerede nukleotidmodifikationsstrategier
Flere valgfri nukleotidmodifikationsstrategier kan forbedre proteinekspression.
- Optimeret reaktionssystem
Opnå et højt transskriptionsforhold og høj dækningseffektivitet.
Opnå et loft på mere end 95 %.
- Stringent kontrol af RNase
Forebyg mRNA-nedbrydning effektivt ved streng kontrol af RNase i det eksperimentelle miljø og forbrugsvarer.
Case study
Yaohai Bio-Pharma har bygget en moden co-transkriptionel capping-procesplatform ved at bruge clean cap-analoger til direkte at tilføje Cap1-struktur og samtidig undgå omvendt capping. Efter standardiseret prøveforbehandling og påvisning af kapillærelektroforese (CE) kan dækningsgraden for mRNA for forstærket grønt fluorescerende protein (eGFP) nå mere end 95 %.
eGFP mRNA capping effektivitet på mere end 95 %
eGFP mRNA og mCherry mRNA fremstillet ved co-transkriptionel afdækning transficeres i henholdsvis 293T-celler, og et stærkt fluorescerende signal observeres efter 48 timer, hvilket tyder på, at mRNA'et udtrykkes effektivt i 293T-celler.
Ekspression af eGFP mRNA og mCherry mRNA i 293T celle
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
INGEN
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
