Grundlaget for indkapsling er design og udvikling af leveringssystemet. Et veldesignet leveringssystem tillader circRNA-molekyler at komme ind i kroppen uden at blive nedbrudt af RNA-enzymer og derefter effektivt afgives til målstedet, krydse cellemembranen og frigives intracellulært.
Lipid nanopartikler (LNP'er) er det bedste leveringssystem til rådighed, med fordele i indkapsling, in vivo ekspression og in vivo sikkerhed sammenlignet med andre leveringssystemer. LNP'er med nukleinsyrefragmenter sluges let ind i celler og danner intracellulære legemer. Når først det kommer ind i cellen, protonerer det sure miljø i det intracellulære legeme og positivt oplader hovedet af det ioniserede lipid, hvorved det smelter sammen med den indre membran af det intracellulære legeme og frigiver målnukleinsyren ind i cellen til handling.
Yaohai Bio-Pharma circRNA-service fortsætter med at forbedre og kan levere circRNA-LNP-indkapslingsservice for at optimere relevante kritiske procesparametre og forbedre konsistensen og reproducerbarheden af circRNA-lægemiddelproduktion.
Proces | Service detaljer | Leveringsperiode (dag) | Leverancer |
circRNA-LNP indkapsling | Materiale og flydende forbehandling | 2 | circRNA-LNP lægemiddelprodukt (DP) |
Mikrofluidisk enhedsblanding | |||
Tangentiel flowfiltrering | 1 | ||
Steriliserende filtrering | |||
circRNA-LNP kvalitetskontrol | Indkapslingseffektivitet | 1 | Test rapport |
Partikelstørrelse og polydispersitetsindeks | |||
Zeta potentiale |
Hurtig syntese, høj R&D-effektivitet og præoptimerede løsninger;
Indkapslingsforholdet kan nå mere end 90%;
Størrelsen af lipid-nanopartikler kan kontrolleres ved at ændre væskeinjektionshastigheden og -forholdet;
circRNA-LNP-produkter valideres ved in vitro celleekspression og kan udtrykke målproteinet effektivt.
LNP-eGFP circRNA prøver fremstilles, og de forskellige doser af dem (1 ug, 2 ug og 4 ug) transficeres direkte ind i 293T-celler for at verificere, om de kan udtrykke målproteinet. Efter 48 timers transfektion kan et klart fluorescerende signal observeres, og der er en dosis-eskalerende effekt af fluorescensintensitet.
Lipo-circ_eGFP, der består af liposom og uindkapslet eGFP circRNA, tages som en kontrol.