Med hensyn til masseproduktion af mRNA er in vitro transkription (IVT) en mere effektiv og moden metode. IVT-reaktionen anvender lineariseret plasmid-DNA indeholdende T7-promotoren som skabelon, og mRNA syntetiseres med nukleosidtrifosfater (NTP'er) som substrater i nærvær af T7-RNA-polymerase.
Nukleotidmodifikation er et gennembrud i udforskningen af mRNA, hvor umodificerede mRNA-molekyler genkendes af intracellulære RNA-sensorer for at aktivere medfødt immunitet. Af hensyn til mRNA in vivo-immunogenicitet og translationseffektivitet anvender IVT-processen sædvanligvis visse typer modificerede NTP'er, og almindelige modificerede nukleotider er pseudouridin (Ψ), N1-methyl-pseudouridin (N1Ψ) og 5-methylcytosin (5mC).
In vitro transkriptionsproces af mRNA
In vitro transkription (IVT) reaktionsdiagram
Tjenester detaljer
Valgfri service | Service detaljer | Leveringsperiode (hverdag) |
In vitro transkription (IVT) | IVT, In vitro transkription | 1 |
| Nukleotidmodifikationer (Ψ/N1Ψ/5mC osv.) |
| Fjernelse af DNA-skabelon (DNase I) |
IVT tilstandsoptimering - valgfrit | IVT reaktionskomponenters design og optimering | 2-5 |
Vores egenskaber
- Diversificerede nukleotidmodifikationsstrategier
Forbedre mRNA-stabilitet og proteinekspression in vivo.
- Strenge testdesign og optimering
mRNA-fragmentfremstilling op til 10 kb kan opnås.
Ved at optimere IVT-reaktionsbetingelserne er transkriptionshastigheden op til 1:200.
- Stringent kontrol af RNase
Stringent kontrol af RNase gennem et eksperimentelt miljø og forbrugsvarer kan effektivt forhindre mRNA-nedbrydning.
Case Study
Det nuværende IVT-reaktionssystem er groft optimeret til syntetiske systemer med en længde på omkring 100 nt, ikke til mRNA'er af vilkårlig længde. Jo længere mRNA-sekvensen er, jo sværere er den at transskribere og jo mere tilbøjelig til nedbrydning.
For at fremstille skræddersyede mRNA-sekvenser med en længde på ca. 10 kb har Yaohai Bio-Pharma med succes forberedt højkvalitetsprøver med et højt transkriptionsforhold på 1:135 og opnået 135 μg oprindeligt oprensede mRNA-produkter efter 1 μg lineariseret plasmid blev transskriberet in vitro gennem strengt eksperimentelt design, kontinuerlig optimering af reaktionsbetingelser og streng kontrol af RNase.
mRNA-identifikation (agarosegelelektroforese)
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
INGEN
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
