Med hensyn til batchpræparation af RNA-precursorer er en almindeligt anvendt metode in vitro-transkription (IVT). IVT-reaktionen anvender lineariseret plasmid-DNA indeholdende T7-promotoren som skabelon og syntetiserer en RNA-precursor med nukleosidtriphosphater (NTP'er) som et substrat i nærvær af T7-RNA-polymerase.
In vitro ringslutningsmetoder omfatter kemisk ligering, enzymatisk ligering og permuteret intron-exon (PIE) metode. Kemisk ligering og enzymatisk ligering er velegnede til ringslutning af kortere RNA'er. Når fragmentet er større end 100 nt, vil ringslutningshastigheden falde kraftigt. I modsætning hertil kan nukleasemetoden baseret på PIE-systemet opnå ringslutning af 8 kb-sekvenser.
Under katalyse af guanosintriphosphat (GTP) gennemgår PIE-strukturen cyklisering af ekstra-intronsekvenser. Kombineret med en fornuftig strategi til at øge cykliseringshastigheden kan Yaohai Bio-Pharma opnå cyklisering på op til 4 kb sekvenser med en cykliseringseffektivitet på mere end 80%.
In vitro cykliseringsreaktionen af RNA flyder som følger:
RNA-precursoren syntetiseres ved in vitro-transkription, og PIE-komponenten fuldender selvsplejsning under katalyse af GTP for at danne circRNA.
Tjenester detaljer
| Proces | Service detaljer | Leveringsperiode (hverdag) |
| In vitro transkription og cirkulation | Bekræftelse af reaktionssystem | 1-2 |
| In vitro transkriptions- og ringslutningsreaktioner |
| RNase R fordøjelse |
| Reaktionsoptimering | Reaktionssammensætning, tidsoptimering | 2-5 |
Vores egenskaber
- Strenge testdesign og optimering
Op til 4 kb RNA-cyklisering kan opnås.
- Høj cykliseringseffektivitet
En cykliseringsrate på mere end 80 % kan opnås gennem en rationel sekvensoptimeringsstrategi.
- Stringent kontrol af RNase
Gennem stringent kontrol af RNaser i det eksperimentelle miljø og forbrugsvarer forhindres RNA-nedbrydning effektivt.
Case study
In vitro cyklisering og berigelse af circRNA
Baseret på PIE-systemet har Yaohai Bio-Pharma optimeret sekvensen af circRNA med en cykliseringshastighed på mere end 80 % ved agarosegelelektroforese (AGE). Ved at bruge RNase R til at berige circRNA viser resultaterne af E-gel-elektroforese, at den lineære RNA-precursor er fordøjet, og efter yderligere oprensning kan det meste af det nicked circRNA fjernes. Oprensningsopløsningen er selvudviklet af Yaohai Bio-Pharma.
In vitro cirkulation og berigelse af circRNA
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
INGEN
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
