Cirkulært mRNA (circRNA) har været meget brugt i studiet af gen- eller proteinfunktioner. I mellemtiden er det populært i udviklingen af profylaktiske og terapeutiske biologiske lægemidler, der ligner mRNA.
Yaohai Bio-Pharma har etableret et sæt circRNA-synteseteknologier til at levere RNA af høj kvalitet, såsom sekvensdesign og optimering, in vitro transkription (IVT), cirkularisering/cyklisering, oprensning og lipid nanopartikel (LNP) indkapsling. Alle produkter frigives under de strenge kvalitetskontrolstandarder (QC).
Sammenlignet med lineært mRNA er cirkulært RNA (circRNA) mere stabil i strukturen og er et vigtigt hot spot i den nuværende nukleinsyrelægemiddelforskning. Det har en bred vifte af anvendelser inden for forskellige områder, hvad enten det er som kodende circRNA eller ikke-kodende circRNA, herunder profylaktiske vacciner mod infektionssygdomme, terapeutiske onkologiske vacciner, terapeutiske onkologiske lægemidler, proteinerstatningsterapi, regenerativ medicin, celle- og genterapi (CGT) , molekylær svamperolle og RNA-aptamer.
Proces | Valgfri service | Service detaljer | Leveringsperiode (dag) |
circRNA sekvensdesign og optimering | Design og optimering af kodningssekvenser | CDS Codon optimering | 1 |
Design og optimering af ikke-kodende sekvenser | Intron og Exon Sequence, Homolog Arm and Spacer Design og optimering | 1-2 | |
Cirkulær plasmidpræparation | Gensyntese | Gensyntese (tredjepart) | 7-10 |
Plasmidamplifikation | Plasmidamplifikation | 2 | |
Plasmidekstraktion | |||
Lineariseret plasmidpræparation | Plasmid linearisering og oprensning | Plasmid linearisering | 1 |
Linearisering DNA-rensning | |||
In vitro-transskription og cyklisering | In vitro-transskription og cyklisering | In vitro transkription og cykliseringsreaktioner | 1-2 |
RNase R Fordøjelse | |||
Optimering - valgfri | Reaktionssammensætning, Tidsoptimering | 2-5 | |
circRNA oprensning | Konventionel oprensningsmetode | Lithiumchloridudfældning | 1 |
Magnetisk perlerensning | 1 | ||
Meget ren circRNA-oprensning | Præparativ højtydende væskekromatografi (HPLC) | 1-2 | |
Bufferudveksling | Ultrafiltrering | 1 | |
circRNA-lyofilisering | Prøvefyldning | Påfyldning | 2-3 |
frysetørring | Forfrysning | ||
Primær tørring (sublimering) | |||
Sekundær tørring (desorption) | |||
circRNA-LNP-indkapsling | LNP indkapsling | Materiale og flydende forbehandling | 2 |
Mikrofluidisk enhedsblanding | |||
Bufferudveksling | Tangentiel flowfiltrering | 1 | |
steriliseret | Filtrering | ||
Kvalitetskontrol af plasmid-DNA | Koncentration/renhed | Ultraviolet (UV) spektrofotometri | 1-2 |
Plasmidkonformation | Agarosegelelektroforese (AGE) | ||
Kapillærelektroforese (CE) - valgfri | |||
Plasmididentifikation | Restriktionsenzymidentifikation/ALDER | ||
Kvalitetskontrol af circRNA | Koncentration/renhed | Ultraviolet (UV) spektrofotometri | - |
Renhed | Agarose Gel Elektroforese (AGE)/E-Gel | 0.5 | |
HPLC-valgfri | 1 | ||
Kvalitetskontrol af circRNA-LNP | Indkapslingseffektivitet | RiboGrøn metode | 1 |
Partikelstørrelse | Dynamisk lysspredning (DLS) | 1 | |
Polydispersitetsindeks | Dynamisk lysspredning (DLS) | 1 | |
Zeta-potentiale | Dynamisk lysspredning (DLS) | 1 | |
Cellebaseret styrkeanalyse | Celletransfektion | Celleplader, celletransfektion | 4 |
Målproteindetektion | Fluorescensobservation, Western Blot/ELISA | 1-3 |
Vi transficerede forstærket grønt fluorescerende protein circRNA (eGFP circRNA), mCherry circRNA, luciferase circRNA i 293T-celler og detekterede målprotein gennem fluorescens, luminescerende eller farvesignal, western blot (WB), enzym-linked immunosorbent assay (ELISA).
Cellebaserede styrkeanalyser af circRNA-prøver af Yaohai Bio-Pharma